產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

D-Luciferin（D 熒光素）：有三種，分別是 D-Luciferin, Sodium Salt/D 熒光素鈉鹽、D-Luciferin, Potassium Salt/D-熒光素鉀鹽和 D-Luciferin Firefly,free acid/D-螢火蟲(chóng)熒光素

我公司提供幾種常用類(lèi)型的 D-Luciferin，每批試劑都經(jīng)過(guò)嚴格的質(zhì)量驗證（經(jīng) 9 次獨立的 HPLC 和 FTIR 標準法監測）和發(fā)光效率檢測，確?？蛻?hù)每次試驗的高重復性和成功性。所有產(chǎn)品都可用于體內成像分析和體外化學(xué)發(fā)光檢測實(shí)驗。D-Luciferin 是合成的螢火蟲(chóng)熒光素，結構與 promega 公司提供的甲蟲(chóng)熒光素一致，是水溶性的螢火蟲(chóng)熒光素酶底物。

熒光素（Luciferin）是常見(jiàn)生物性發(fā)光報告基因熒光素酶（luciferase）在體內成像的底物。作用原理是熒光素酶在Mg2+和O2參與下催化熒光素氧化成oxyluciferin,在熒光素的氧化過(guò)程中，發(fā)出生物熒光(bioluminomescence)。然后通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀或液閃測定儀測定生物熒光。目前市場(chǎng)上有三種產(chǎn)品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素鈉鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產(chǎn)品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無(wú)毒性，特別適合體內實(shí)驗。配成液體后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數的應用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別。

產(chǎn)品信息

應用：1）活細胞、組織或生物體內 luc 標記基因和熒光素酶-融合基因體內/體外表達的成像分析；

2）廣泛用于報告基因分析，免疫分析和 ATP 熒光衛生監測分析；

使用方法：

1．體外生物發(fā)光檢測

1）1g的D-Luciferin Firefly, free acid溶解入33.3ml的無(wú)菌水中，配制成30mg/ml的儲存液（200×）?；靹蚝笥?span>0.2μm濾膜過(guò)濾，然后立即使用或分裝于-80℃避光保存，避免反復凍融，凍存的儲存液可保存1年。

注：D-Luciferin Firefly, free acid儲存液也可用弱堿（如 NaOH，KOH溶液）或DMSO溶解，用堿性pH溶液去溶解本品，如果有沉淀發(fā)生則需要調整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液來(lái)中和，調整至所需的pH環(huán)境。

2）用完全培養基將儲存液按 1:200稀釋?zhuān)▋Υ嬉海和耆囵B基1:200），配制成工作液（終濃度150μg/ml）。

3） 成像前，去除培Luciferase表達細胞中的培養基，加入1×熒光素工作液37℃孵育5min, 然后進(jìn)行圖像分析。

4）工作液應在使用后丟棄。

2．體內活體成像檢測

1）1g的D-Luciferin Firefly, free acid用66.6ml的DPBS(, w/o Mg2+ 和Ca2+)配制 D-熒光素工作液（15mg/ml），0.2μm 濾膜過(guò)濾除菌?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b于-80℃避光保存，避免反復凍融。一旦使用，放到 4℃解凍，保持冰冷且避光，凍存的儲存液可保存1年。

注：D-Luciferin Firefly, free acid儲存液也可用弱堿或DMSO（w/o Mg2+）配置。

2）  每只老鼠的注射量取決于老鼠的體重：150mg/Kg。

3） 注射入體內 10-15min后，進(jìn)行成像分析。

注：建議對每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)，從而確定最高信號檢測時(shí)間和信號平臺期。

注意事項：

1） 本品保存和操作的過(guò)程中都要避光。另外儲存液過(guò)濾除菌后，-80℃分裝保存，避免反復凍融。如果有條件，對儲存液充氮氣或氬氣（防止氧化），穩定性和保存時(shí)間更長(cháng)，長(cháng)達1年。

2） 注射方式，動(dòng)物類(lèi)型以及體重等都會(huì )影響信號的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)，確定最佳信號平臺期和最佳的檢測時(shí)間。