產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Dispase中文名稱(chēng)為中性蛋白酶，也稱(chēng)為分散酶，是一種非特異性的金屬蛋白酶，被用來(lái)從各種不同組織或器官中消化細胞外基質(zhì)，釋放并制備原代單細胞；或用于細胞培養中的細胞收獲或接種轉移；也被用于防止懸浮細胞培養時(shí)的細胞意外結團。蛋白水解酶類(lèi)，如胰蛋白酶、膠原酶和鏈酶蛋白酶都被用語(yǔ)來(lái)分散組織、分類(lèi)細胞，但他們常傷害細胞，并且在培養時(shí)不穩定，甚至可能引入支原體污染。Dispase就沒(méi)有這個(gè)問(wèn)題，不會(huì )給細胞膜帶來(lái)傷害，而且因為其來(lái)自細菌，故不會(huì )引入支原體或任何動(dòng)物病毒；溫度、pH、血清成分等的差異對Dispase影響很小。Dispase經(jīng)稀釋后其活性就大大降低，這也方便了后續的培養。Dispase甚至被加入細胞培養懸液中用于防止細胞團結。該酶具有以下優(yōu)勢：1）一種快速有效且溫和的細胞消化酶，對細胞損傷小，且能維持細胞膜完整性；2）來(lái)源于細菌，無(wú)支原體或其他動(dòng)物病毒污染；3）穩定性強，不受溫度、pH及血清組分的影響；4）可用于多種類(lèi)型組織和細胞的分離等。本品非無(wú)菌Dispase II，來(lái)源于Bacillus polymyxa，使用時(shí)需對其除菌處理，用于細胞培養時(shí)常用工作濃度為0.6-2.4Uml。

產(chǎn)品性質(zhì)

比活性（Specific Activity）：≥0.8Umg (+37°C, casein as substrate, pH 7.5)

單位定義（Unit Definition）：在溫度37℃、pH值為7.5的條件下，每分鐘水解酪蛋白釋放出相當于1μM(181μg)酪氨酸的福林陽(yáng)性氨基酸和肽所需要的酶量，即為一個(gè)蛋白酶活性單位，以U表示。

最佳pH（pH Optimum）：6.0-8.5

抑制劑（Inhibitors）：EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金屬離子。血清不會(huì )抑制dispase活性。

激活劑（Activator）：Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。最佳的Ca2+濃度為2mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其處于最佳活性。

母液及工作液配制

1.用Hepe緩沖鹽溶液（50mM HepesKOH pH7.4, 150mM NaCl）溶解適量本品凍干粉，配制成10mgml的儲存液，用0.22μM濾膜過(guò)濾除菌。

2.使用時(shí)用適當細胞培養液將上述儲存液稀釋到工作液濃度即可，用于細胞分離時(shí)其常用工作濃度為0.6-2.4Uml?！咀ⅰ浚翰煌扑]使用高于2.4Uml的工作濃度。

使用方法

A.組織的解離

1）用無(wú)菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊；

2）用無(wú)菌PBS清洗組織塊；

3）向上述組織塊中加入Dispase II溶液（工作濃度為0.6-2.4Uml），并確保組織塊全部浸沒(méi)于Dispase 溶液中。

4）37℃孵育，孵育過(guò)程緩慢攪拌直至組織塊全部解離?！咀ⅰ浚喝舻谝淮问褂迷撁?，可通過(guò)細胞計數來(lái)確定需要的總孵育時(shí)間。一般對于較難解離組織，1h即可達到分離目的，但更長(cháng)時(shí)間（如數小時(shí)）的孵育也不會(huì )明顯影響細胞活性。

5）如有需要，可將上述消化產(chǎn)物通過(guò)無(wú)菌不銹鋼網(wǎng)篩過(guò)濾，以分開(kāi)單細胞與殘留的組織塊?；蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細胞，若是需要，換用新鮮dispase溶液以進(jìn)一步解離殘留組織。

6）離心沉淀細胞，倒掉酶溶液；

7）用培養基重懸細胞沉淀，并于常規條件下培養細胞。

B. 細胞傳代

1）利用Dispase 溶液（37℃預熱）浸沒(méi)細胞，于37℃孵育5min；

2）吸除上述溶液，繼續于37℃孵育10min；

3）顯微鏡下觀(guān)察細胞分離情況，如需要，可進(jìn)一步孵育15min；

4）利用細胞培養基懸浮細胞，輕輕旋轉使得細胞沉淀并用培養基清洗細胞；

5）換用新鮮細胞培養液重懸細胞，并按常規方法進(jìn)行細胞鋪板。

運輸和保存方法

冰袋運輸。

凍干粉4℃保存。儲存液于4℃可穩定保存2周，若長(cháng)期保存，請分裝后于-20℃凍存。避免反復凍融。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

Dispase 是Godo shuseiCo,Ltd的注冊商標。