產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

DiA 是一種細胞膜綠色熒光染料，它在細胞膜中的擴散速度比 DiO 快，并且經(jīng)常和 DiI 一起使用于細胞膜雙染色，屬于親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染色細胞膜和其它脂溶性生物結構。DiA不溶于水，當它與細胞膜結合，其熒光強度會(huì )顯著(zhù)增強。一旦應用于細胞中，這種染料會(huì )在細胞內質(zhì)膜中逐步擴散，最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細胞膜染色。DiA可與DiI聯(lián)合使用進(jìn)行神經(jīng)元細胞的雙色標記。研究發(fā)現，某些情況下當DiO不能標記固定組織時(shí)，DiA可得到良好的標記效果。DiA與磷脂雙層膜結合后，光譜遷移明顯加強。正由于其發(fā)射光譜非常廣，在適當的濾光片下，可以綠色、橙色甚至紅色熒光被檢測到。DiA產(chǎn)品的光譜學(xué)相關(guān)參數為Ex=491nm，Em=613nm。

四種染料呈現不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標準FITC和TRITC濾光器檢測，可結合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激發(fā)，具有比DiI更長(cháng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(cháng)，特別適合用于標記具本底熒光的細胞和組織。而，DiR在體內活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細胞和組織，并且在紅外光范圍內，其本底熒光水平很低。

產(chǎn)品特性

CAS NO.：114041-00-8

化學(xué)名：[4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide]

分子式：C46H79IN2

分子量：787.04

純度：≥98%（HPLC）

Ex/Em：491/613 nm

外觀(guān)：紅色固體

溶解性：溶于DMSO

保存條件：-20℃避光保存，一年有效。

使用方法：

染色液制備

a.配置DMSO儲存液：儲存液用DMSO配置濃度1～5 mM。

【注】：1未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融，可穩定保存6個(gè)月。

必須保證所用溶劑新鮮無(wú)水。

工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。

工作液最終濃度建議根據不同細胞系和實(shí)驗體系來(lái)優(yōu)化。

b. 懸浮細胞染色

1.加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。

2.37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養時(shí)間不同?？梢?span>20 min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

3.孵育結束，按1000～1500 rpm離心5 min。

4.傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長(cháng)培養液重懸細胞。

5.重復（3），（4）步驟兩次以上。

c. 貼壁細胞的染色

1.將貼壁細胞培養于無(wú)菌蓋玻片上。

2.從培養基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

3.在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細胞。

4.37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養時(shí)間不同?？梢?span>20 min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

5.吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10 min，然后吸干培養基。

d. 顯微鏡檢測

☆DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參考表1。

☆多色染料的同時(shí)檢測，濾光器按照以下設定：

DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

注意事項

熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，染色過(guò)程需盡量避光。

為了您的健康，實(shí)驗操作時(shí)請穿實(shí)驗服和帶一次性手套。

表1細胞膜探針光譜和濾鏡編號: