產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

是一種細胞滲透型的carbocyanine結構衍生物，包含標記線(xiàn)粒體的弱巰基反應性的氯甲基官能團。本品是一種亮綠色熒光探針（（Ex=490 nm，Em=516 nm）），其在水溶液中幾乎不發(fā)熒光，只有當聚集在線(xiàn)粒體的脂質(zhì)環(huán)境才能發(fā)熒光，背景熒光幾乎可忽略。使得操作步驟極其簡(jiǎn)單，只需用探針?lè )跤毎?，即可被?dòng)運輸穿過(guò)細胞膜并直接聚集在活性線(xiàn)粒體上，可不經(jīng)過(guò)清洗直接觀(guān)察。與線(xiàn)粒體紅色熒光探針同的是本品定位于線(xiàn)粒體的能力不受線(xiàn)粒體膜電位影響，使其可能作為定量線(xiàn)粒體質(zhì)量的一種工具。本品經(jīng)乙醛固定后染料不穩定，因此更適合活細胞染色。

雖然傳統的線(xiàn)粒體熒光探針如TMR和羅丹明123，也能很容易的聚集在功能線(xiàn)粒體上，但是一旦線(xiàn)粒體膜電位喪失即會(huì )被洗掉，從而在一些需要細胞進(jìn)行醛類(lèi)固定或者包含線(xiàn)粒體能量狀態(tài)影響因子的實(shí)驗中，使其應用大受限制。

使用方法

1儲存液的配制

本品是以粉末形式提供，使用前需將本品回溫至室溫。

之后使用細胞培養級別的無(wú)水DMSO將其充分溶解至終濃度1 mM。

本品M. Wt.= 671.88 g/mol，換算下來(lái)，50 μg粉末只需加入74.4μL DMSO即可得到1 mM儲存液。

可根據單次的使用量將儲存液分裝后放到-20℃避光，避免反復凍融。

2工作液的配制

根據不同的實(shí)驗目的使用不同的探針濃度，以下的起始操作條件僅作參考，可根據細胞類(lèi)型和其他的相關(guān)因素如細胞或組織的透化等進(jìn)行適當調整。

用適當的緩沖液或者細胞培養基稀釋1 mM儲存液至工作液濃度。本探針推薦濃度為20-200 nM，濃度過(guò)高可能對其他細胞結構進(jìn)行染色。

3染色及檢測

1）貼壁細胞的染色

培養皿/板內加入適量的培養基覆蓋蓋玻片進(jìn)行爬片培養。當細胞長(cháng)至所需豐度，吸除培養液，加入37℃預熱的染色工作液。在所使用細胞正常培養條件下孵育15-45 min（最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化）。染色結束后，使用新鮮培養液或緩沖液替換上述染色液，即可將其置于熒光顯微鏡下觀(guān)察或熒光酶標儀下讀數。

2）懸浮細胞的染色

離心收集細胞，吸除上清，利用37℃預熱的染色工作液輕輕重懸細胞。在所使用細胞正常培養條件下孵育15-45 min（最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化）。染色結束后，離心收集細胞，利用37℃預熱的新鮮培養液或緩沖液重懸細胞，被染色的細胞可用流式細胞儀、熒光酶標儀、熒光顯微鏡進(jìn)行分析。

注意事項

1）DMSO有毒，使用時(shí)請小心操作。

2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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