產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

溶酶體綠色熒光探針DND-26 是對活細胞中的酸性區室進(jìn)行染色的一種綠色熒光染料，具有 504/511 nm 的最大激發(fā) /發(fā)射波長(cháng)。本品以溶于無(wú)水DMSO的1mM儲存液形式提供。

使用方法

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使 DMSO 溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據不同的實(shí)驗要求、細胞類(lèi)型、細胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用培養基或合適的緩沖液將 1mM   儲存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度為 50-75nM ；

【注意】： 1 ）為了降低探針加載過(guò)度可能引起的假陽(yáng)性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。 2 ）若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育，會(huì )觀(guān)察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現象。

2.  染色

2.1對于貼壁細胞

1 ）將細胞置于培養皿中的蓋玻片上，加入合適培養基，使其爬片生長(cháng)。

2 ）待細胞生長(cháng)到合適豐度，吸除培養液，加入適量 37 ℃預熱的含探針工作液。于生長(cháng)狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體孵育時(shí)間需根據細胞類(lèi)型而定）?！咀⒁狻浚簩?溶酶體綠色熒光探針 DND-26 內化過(guò)程的動(dòng)力學(xué)研究表明，活細胞攝取此染料僅需數秒即可。缺點(diǎn)在于此探針可能引起溶酶體產(chǎn)生“堿性效應 Alkalizing effect ”，也就是說(shuō)過(guò)長(cháng)孵育時(shí)間會(huì )誘導溶酶體 pH 值提高。建議僅當該探針于 37 ℃孵育細胞 1-5min 才可用作 pH 指示劑。

3 ）利用新鮮培養基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀(guān)察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(cháng)染色時(shí)間。

2.2   對于懸浮細胞

1 ）離心，吸除上清。

2 ）利用 37 ℃預熱的探針工作液重懸細胞，于生長(cháng)狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體時(shí)間需根據細胞類(lèi)型而定）。

3 ）離心，吸除染色液，加入新鮮培養液重懸細胞。

4 ）置于熒光鏡下觀(guān)察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長(cháng)染色時(shí)間。

【注意】：對于懸浮細胞，也可將細胞貼附于經(jīng) BD Cell-Tak 處理過(guò)的蓋玻片上，然后使用類(lèi)似于貼壁細胞的方法進(jìn)行染色。1）DMSO有毒，使用時(shí)請小心操作。

2）了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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