產(chǎn)品信息

親脂性熒光染料PKH67(Green)和PKH26(Red) 適用于常規細胞膜標記。熒光染料PKH67 是?種可對體外和體內細胞示蹤的綠色熒光染料，通過(guò)與膜結構的脂質(zhì)分?結合?標記細胞。PKH67對細胞毒性較?，熒光背景低，脂溶性?，能夠輕易穿透細胞膜，有著(zhù)強?穩定的綠?熒光。經(jīng)PKH67標記的細胞可?于體外和體內增殖研究，且具有不會(huì )使鄰近細胞染?的功能。在細胞分裂增殖過(guò)程中，PKH67 的熒光強度會(huì )隨著(zhù)細胞的分裂?逐級遞減，標記熒光可平均分配?兩個(gè)?代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的?半，根據這?特性，它可被?于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等??。PKH67標記細胞的熒光?常均?，并且分裂后的?代細胞的熒光分配也更均?。在細胞分裂增殖過(guò)程中，PKH67標記熒光可平均分配?兩個(gè)?代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的?半，通過(guò)流式細胞儀根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂?次(1/2 的熒光強度)，?次(1/4 的熒光強度)，三次(1/8的熒光強度)，以及更多分裂次數的細胞。PKH67 可檢測分裂次數多達六次甚?更多。除了?于細胞增殖檢測，PKH67 還可以?于細胞的體外盒體內?蹤，標記后熒光在胞內表達穩定，陽(yáng)性標記率達98%以上，標記細胞形態(tài)良好，能有效地觀(guān)察細胞在體外的誘導分化情況；或將標記的細胞注?體內，可以有效的顯?移植細胞在活體組織中的遷移及分化。PKH67標記的細胞?于體內觀(guān)察可以長(cháng)達數周之久，它常被?來(lái)做活體細胞檢測實(shí)驗和?熒光電鏡觀(guān)察細胞長(cháng)期活動(dòng)的實(shí)驗。PKH67 毒性較?，不影響細胞的增殖能?。此?法操作簡(jiǎn)單，且不?放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖?，更準確和更安全地得到想要的實(shí)驗數據。

由于炭尾長(cháng)度更長(cháng)，內部研究已經(jīng)證明PKH67比PKH2由更少的細胞間轉移。在采用PKH1和PKH2進(jìn)行的體內研究中，熒光強度都會(huì )緩慢損失。由于這是綠色細胞linker染料而非紅色細胞linker染料出現的行為特征，因而PKH67會(huì )出現類(lèi)似的性質(zhì)。不分裂細胞的體外細胞膜留存和體內熒光半衰期的關(guān)聯(lián)性揭示，PKH67的體內熒光半衰期為10-12天。其他具有類(lèi)似半衰期的綠色細胞linker染料已經(jīng)被用于監測1-2月內的體內 淋巴細胞和巨噬細胞運輸，結果表明PKH67還可用于中等時(shí)長(cháng)的體內跟蹤研究。

染料可以穩定的與細胞膜脂質(zhì)區結合并發(fā)出熒光，主要用于細胞體外標記、體外細胞增殖研究以及體內外的細胞示蹤研究。PKH67的體內熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長(cháng)的半衰期，標記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長(cháng)達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長(cháng)期的體內細胞跟蹤研究。PKH67標記細胞后通常?流式細胞儀進(jìn)?細胞增殖檢測。

試劑盒組分

PKH67標記細胞呈綠?熒光，熒光波長(cháng)：λex=490 nm,  λem=502 nm。

實(shí)驗步驟

1．染色液制備：

（1）從冰箱中取出PKH67試劑，靜置?分鐘?室溫，或者37℃?浴?刻后，離?盛放PKH67 的管?，開(kāi)蓋前請務(wù)必離??分鐘讓試劑充分落?管底后才能開(kāi)蓋。

（2）根據需要檢測的細胞樣品數，?稀釋液將探針10倍稀釋?zhuān)?合適的溶液(如：??清培養基，HBSS或PBS)將PKH67母液25倍稀釋?zhuān)渲瞥扇??作液。最佳?作液濃度請根據不同細胞和??的實(shí)驗體系來(lái)調整。?般細胞使?按試劑盒中的母液的終濃度250倍稀釋即可，有些細胞可能需要適當增加濃度。

2. 細胞染色

（1）將制備好的待測細胞?100μl染??作液重懸，?細胞濃度?約107/ml。也可以進(jìn)?原位染?，染?液?夠覆蓋細胞即可。

（2）在2～8 ℃培養細胞 15～30分鐘，不同的細胞最佳培養時(shí)間不同。

建議待標記細胞在染??作液中于37℃孵育5min，再于4℃孵育15min。

低溫孵育可降低細胞對染料的內吞作?，有助于染料對質(zhì)膜的標記，并且降低染料定位細胞質(zhì)囊泡的可能性。

（3）離?后去上清，收集細胞，?PBS或??清培養基洗滌細胞1-2次，最后加?PBS或??清培養基重懸細胞。

（4）取500μl 細胞懸液，?流式細胞儀檢測。Ex/Em=490/502nm。

（5）隨后還可按照細胞的正常培養?法進(jìn)?培養。

（6）可以在熒光顯微鏡下直接觀(guān)察標記效果，也可以在培養適當時(shí)間后再?流式細胞儀檢測細胞增殖，或?于其他特定實(shí)驗?的的細胞熒光?蹤。

儲存條件：-20℃避光保存有效期1年

注意事項：

1.染?濃度根據細胞種類(lèi)的不同和每孔內細胞數量的多少?異。

2.配制的PKH67母液極易?解，建議分裝保存， ≦-20℃冷凍干燥保存。

3.PKH67 ?作液應現配現?，不能提前配制，因為PKH67 吸?會(huì )分解，影響染?效果。

4.PKH67 易被?解，在?溶液中會(huì )很快變質(zhì)。母液請在使?過(guò)程中避免接觸?。?作液在標記細胞的過(guò)程5.中和?接觸是在許可的時(shí)間范圍內的。

6.PKH67熒光染?劑為乙醇溶液，在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì )凝固?粘在離?管管底、管壁或管蓋內，7.從冰箱取出后恢復?室溫，變成液體狀態(tài)后離??管底部再開(kāi)蓋?？梢?7℃?浴?刻?全部融解后使?。

8.不同的細胞種類(lèi)標記后可以?蹤的代次或時(shí)間差異較?，請根據實(shí)際情況或參考?獻進(jìn)?檢測。

相關(guān)產(chǎn)品：