產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Phleomycin是由Streptomyces verticillus（輪枝鏈霉菌）的突變株產(chǎn)生的一種糖肽抗生素，屬于博來(lái)霉素(bleomycin)家族。Phleomycin可結合并插入DNA，破壞其雙螺旋結構的完整性，Phleomycin在細菌、真菌、酵母、植物細胞和哺乳動(dòng)物細胞上均能發(fā)揮活性，用于篩選攜帶Sh ble基因的轉染細胞，可用于對Zeocin不敏感的細胞。

Warbio公司以20mg/ml的無(wú)菌溶液形式提供，可直接用于細胞培養，在0.1-50μg/ml濃度范圍內，腐草霉素可以抑制大多數好氧細胞的生長(cháng)。

產(chǎn)品性質(zhì)

分子式（Formula）：C55H85O21N20S2Cu-HCl

Cas: 11006-33-0

分子量（Molecular Weight）：1525

外觀(guān)（Appearance）：藍色粉末或藍白色混合粉末

純度（Purity）：>90%(HLPC)

濃度：溶于水(20 mg/ml)和甲醇

應用參考濃度：

1大腸桿菌

攜帶bleomycin抗性基因如Sh ble，Tn5的質(zhì)粒，一旦轉化進(jìn)入大腸桿菌受體菌如HB101， DH5a， MC1061，賦予其腐草霉素抗性。

腐草霉素抗性的轉化子可以在添加5 μg/ml Phleomycin的低鹽LB瓊脂培養基（Yeast extract 5g/L, Tryptone 10g/L, NaCl 5g/L, Agar 15 g/L, pH 7.5）中進(jìn)行篩選。加有腐草霉素的平板可于4℃穩定保存1個(gè)月。

2酵母菌

釀酒酵母的腐草霉素抗性轉化子可在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD培養基中進(jìn)行篩選。

操作步驟：按常規方法進(jìn)行酵母細胞轉化，一旦DNA進(jìn)入細胞后，用YEPD培養基稀釋細胞并置于搖床上培養6h或過(guò)夜，使其抗性性狀得以表達。之后將細胞冰浴1h并涂布培養在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD（pH 7.0）固體培養基上。

3真菌

根據轉化子對Phleomycin 的敏感性不同，在添加有10-50 μg/ml腐草霉素的再生培養基內進(jìn)行篩選。先將細胞在4℃孵育過(guò)夜然后置于生長(cháng)溫度培養，可提高其對抗生素的敏感性。

4 植物細胞

根據植物類(lèi)型不同，選擇5-25 μg/ml Phleomycin進(jìn)行轉化子篩選。

5 哺乳動(dòng)物細胞

5-50 μg/ml Phleomycin，推薦先通過(guò)建立滅殺曲線(xiàn)來(lái)確定濃度。與G418做比較，可能需要更長(cháng)的時(shí)間來(lái)殺死細胞或者使細胞從平板上脫落，尤其當細胞處于高密度的情況。

依細胞系不同，通常需要5~21天來(lái)挑選具腐草霉素抗性的穩定轉染細胞。

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注意事項： 

1）腐草霉素對濃酸較為敏感，但可短時(shí)間暴露于稀酸中。使用前將本品回溫至室溫，并輕輕混勻。

2）腐草霉素有毒，避免直接接觸皮膚，不可吞服。酸性或堿性pH，或次磷酸鈉中會(huì )即刻失效。

3）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

【注1】細胞對腐草霉素的敏感性受pH值影響，如pH值越高，敏感性越高；另外，對于高滲透壓培養基如原生質(zhì)體再生用的培養基，腐草霉素的活性會(huì )明顯降低2-3倍。因此也可能通過(guò)使用低鹽培養基來(lái)降低腐草霉素使用量。

【注2】使用前需將低溫存放的腐草霉素置于室溫回溫，之后低速充分混勻

運輸與保存

4°C或-20°C保存1年，避免反復凍融。