產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

低密度脂蛋白（Low Density Lipoprotein，簡(jiǎn)稱(chēng)為LDL）是通過(guò)脂蛋白酯酶的水解作用，脫去極低密度脂蛋白（VLDL）中的甘油三脂，釋放游離脂肪酸轉化而來(lái)的。因甘油三酯的去除使得膽固醇所占比例提高，增加顆粒本身密度，從而得到LDL。LDL與脊椎細胞表面的受體特異性結合，然后通過(guò)受體介導的內吞作用將膽固醇運輸到全身各處細胞。因此，LDL可以用來(lái)研究受體介導的內吞作用過(guò)程，尤其是在動(dòng)脈粥樣硬化等疾病中，血漿來(lái)源的LDL還可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。

紅色熒光標記人源低密度脂蛋白（Human DiI-LDL）是標記熒光探針Dil（1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）的LDL，可以用來(lái)觀(guān)察培養細胞的LDL結合位點(diǎn)，或篩選LDL受體表達缺陷型細胞突變株。也可以通過(guò)流式細胞術(shù)評估細胞受體水平，或檢測組織內的受體水平。 DiI-LDL是研究細胞內吞作用非常好的標記物。

warbio提供的Human DiI-LDL為無(wú)菌包裝，可以直接稀釋使用。除提供DiI-LDL，我們還提供不帶標記的LDL，以及修飾化的LDL如乙?；?span>LDL（Ac-LDL），以及氧化修飾的LDL（Ox-LDL）。

產(chǎn)品屬性

濃度：0.8-3.0 mg/ml

外觀(guān)：乳狀液體

吸光度比例：Dil/Protein=555nm/275nm=1.30

緩沖液組分：0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4

運輸與保存方法：冰袋運輸；4℃無(wú)菌，建議避光，收到貨后穩定保存6周。切忌凍存！

制備與操作方法

純化的人健康血漿來(lái)源的LDL直接標記上DiI熒光探針，然后通過(guò)超速離心以及透析的方法純化回收標記產(chǎn)物，并濾膜過(guò)濾除菌。純化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS，pH 7.4中。

操作步驟

a)  無(wú)菌條件下，將DiI-LDL用細胞培養基稀釋至25-50 μg/ml。

b)  加入活細胞內，37℃培養4-5小時(shí)。

c)  孵育結束，吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培養基，并用無(wú)探針的培養基洗幾次。

d)  根據實(shí)驗需求用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。

1)  熒光顯微鏡觀(guān)察

采用標準的羅丹明激發(fā)：發(fā)射濾光片（或建議使用波長(cháng)為：Ex/Em=549nm/565nm）；若需要請使用含3%甲醛的PBS進(jìn)行固定，切勿使用甲醇或丙酮固定，因Dil易溶于有機溶劑。注：需設陽(yáng)性細胞以做對照。

2）細胞分選（流式細胞術(shù)）

胰蛋白酶處理細胞或者加入EDTA制成單細胞懸液，選用合適的已標記純化細胞用作陰性和陽(yáng)性對照，從而進(jìn)行流式分選設門(mén)（gate）。（建議使用波長(cháng)為Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm）。

注意事項

本品的稀釋工作液極不穩定，建議即配即用；

長(cháng)期貯存可能會(huì )有沉淀析出，屬于正?，F象，低速離心2 min去除沉淀即可使用；

LDL與LDL受體的結合需要Ca2+和Mn2+的參與，過(guò)量EDTA的存在會(huì )抑制其結合；

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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