產(chǎn)品簡(jiǎn)介

        miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（by stem-loop）是miRNA cDNA第一鏈合成的專(zhuān)用試劑盒(莖環(huán)法)。其中包含42℃, 2min的基因組DNA去除步驟，操作簡(jiǎn)便，可快速消除基因組DNA的干擾。本產(chǎn)品包含新一代逆轉錄酶ToLoScript III RTase以及針對miRNA的基因組去除與逆轉錄反應優(yōu)化的最適緩沖液，從而有利于miRNA特異性逆轉錄產(chǎn)物的生成。建議使用ToloBio通用型2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal，#22204)進(jìn)行cDNA產(chǎn)物后續定量。

產(chǎn)品優(yōu)勢

? 優(yōu)異的線(xiàn)性關(guān)系：在一定的模板區間內具有優(yōu)異線(xiàn)性關(guān)系，模板含量最低檢測限可低至pg級。
? 最適的反應體系：含有針對新一代逆轉錄酶ToLoScript III RTase，以及miRNA的基因組去除與逆轉錄反應優(yōu)化的最適緩沖液，更有利于miRNA特異性逆轉錄產(chǎn)物的生成。

 實(shí)驗案例

         以293T細胞的miRNA的10倍稀釋梯度（1μg~10 pg）為模板，使用Tolobio#22112以及Supplier A，按照各自說(shuō)明書(shū)推薦程序進(jìn)行逆轉錄反應，得到的cDNA使用2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix(Tolobio #22204)擴增hsa-miR-19a基因。實(shí)驗結果顯示，在一定的模板區間內，本產(chǎn)品相比于同類(lèi)產(chǎn)品具有優(yōu)異的線(xiàn)性關(guān)系。

實(shí)驗流程

1.基因組DNA去除
1.1去除gDNA反應體系
室溫融化5 × miR gDNA Erase-Out Mix、10 × miR RT Buffer (stem)及ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) 后置于冰上，在RNase-free離心管中配制如下反應體系：

用移液器吹打混勻后短暫離心。

1.2 去除gDNA反應程序

2.第一鏈cDNA合成

2.1第一鏈cDNA合成反應體系

用移液器吹打混勻后短暫離心。

2.2第一鏈cDNA合成反應程序

逆轉錄產(chǎn)物可直接進(jìn)行下游qPCR檢測。若短期內不進(jìn)行下游實(shí)驗，可-20℃保存。若需長(cháng)期保存，建議分裝后保存于-80℃，避免反復凍融。

 產(chǎn)品組成

a.包含dNTP；
b.包含ToLoScript III RTase, RNase inhibitor。

 保存條件

       -20℃保存，≤ 0℃運輸；