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    黃嘌呤氧化酶(XOD)檢測試劑盒(微量法 100T/96S)

    貨號 SH0026 售價(jià)(元) 576
    規格 100T/96S CAS號
    • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
    • 相關(guān)產(chǎn)品

    貨號

    名稱(chēng)

    規格

    SH0026

    黃嘌呤氧化酶(XOD)檢測試劑盒(微量法 100T/96S)

    100管/96樣

    正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

    測定意義:

    XODEC 1.17.3.2)催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子,是活性氧主要來(lái)源之一;同時(shí)也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動(dòng)物的心,肺,肝臟等組織中,當肝功能受損時(shí),XOD大量釋放到血清中,對肝損害的診斷具有特異性的意義。

    測定原理:

    XOD催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰。

    試劑組成和配制:

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    SH0026-100T/96S

    Storage

    提取液:液體

    100ml

    4℃

    試劑一:液體

    30ml

    4℃

    試劑二:粉劑

    2

    4℃

    說(shuō)明書(shū)

    一份

    需自備儀器和用品:

    紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水。

    粗酶液提?。?/span>

    1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

    細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細菌或細胞加入1ml提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

    組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

    2、血清(漿)樣品:直接檢測。

    測定步驟:

    1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長(cháng)至290nm,蒸餾水調零。

    2、 XOD檢測工作液的配制:用時(shí)在每瓶試劑二中加入15ml試劑一,充分混勻,待用;現配現用;

    3、 測定前將XOD檢測工作液在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

    4、 準備96UV板一塊(非普通酶標板,普通酶標板只能透過(guò)可見(jiàn)光,不能透過(guò)紫外光,檢測波長(cháng)小于340nm務(wù)必使用UV板)。

    5、在微量石英比色皿或96UV板中加入10μl樣本和250μl工作液,立即混勻并計時(shí),記錄290nm下初始吸光值A11min后的吸光值A2。計算ΔAA2-A1。

    XOD活性計算:

    a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

    1、血清(漿)XOD計算:

    單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

    XODnmol/min/ml)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷V÷T=2131×ΔA

    2、組織、細菌或細胞中XOD計算:

    1)按樣本蛋白濃度計算:

    單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

    XODnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr)÷T =2131×ΔA÷Cpr

    2)按樣本鮮重計算:

    單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

    XODnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109W ×V÷V樣總)÷T=2131×ΔA÷W

    3)按細菌或細胞密度計算:

    單位的定義:每一萬(wàn)個(gè)細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

    XODnmol/min/104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109500×V÷V樣總)÷T=4.26×ΔA

    V反總:反應體系總體積,2.6×10-4 L;ε:尿酸摩爾消光系數,1.22×104 L/ mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 ml;V樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;500:細胞或細菌總數,500萬(wàn)。

    b.96孔板測定的計算公式如下

    標準條件下的回歸曲線(xiàn)為y = 1.2396x + 0.0259,R2 = 0.9977;其中y△A,xNADPH濃度nmol/ml

    1、血清(漿)中NADPH含量計算

    NADPH含量(nmol/ml= [(△A -0.0259÷1.2396×V1)] ÷(V3×V1÷V2)= 16.1× (△A -0.0259

    2、組織、細菌或細胞中NADPH含量計算

    (1)按樣本蛋白濃度計算

    NADPH (nmol/mg prot=[ (△A -0.0259÷1.2396×V1)] ÷(V1×Cpr)= 0.8× (△A -0.0259÷Cpr

    (2)按樣本鮮重計算

    NADPH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0259÷1.2396×V1) ]÷(W×V1÷V2)=1.6× (△A -0.0259÷W

    (3)按細菌或細胞密度計算

    NADPH (nmol/104 cell=[(△A -0.0259÷1.2396×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.003× (△A -0.0259

    V1:加入反應體系中樣本體積,0.05ml;V2:加入提取液體積,2ml;V3:加入血清(漿)體積:0.1ml;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數,500萬(wàn)。

     

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