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    二胺氧化酶(DAO)檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)

    貨號 SH0045 售價(jià)(元) 1176
    規格 50T/24S CAS號
    • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
    • 相關(guān)產(chǎn)品

    貨號

    名稱(chēng)

    規格

    SH0045

    二胺氧化酶(DAO)檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)

    50管/24樣

    正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

    測定意義:

    DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動(dòng)物(腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等)、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛,其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān),能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。

    測定原理:

    DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過(guò)氧化氫,外源添加過(guò)量的辣根過(guò)氧化物酶,催化過(guò)氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺生成氧化型鄰聯(lián)茴香胺,在460nm處有特征吸收峰,通過(guò)測定該波長(cháng)吸光度增加速率,計算DAO活性。

    試劑組成和配制:

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    SH0045-50T/24S

    Storage

    提取液:液體

    80ml

    4℃

    試劑一:液體

    0.6ml

    4℃

    試劑二:液體

    6ml

    4℃

    試劑三:液體

    3ml

    4℃

    說(shuō)明書(shū)

    一份

    自備儀器和用品:

    天平、低溫離心機、可見(jiàn)分光光度計、1 ml玻璃比色皿、蒸餾水。

    粗酶液提?。?/span>

    1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1ml提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

    2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細胞加入1ml提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

    3、血清等液體:直接測定。

    測定步驟:

     

    對照管

    測定管

    粗酶液μl

    250

    250

    提取液μl

    640

    540

    試劑一μl

    10

    10

    試劑二μl

    100

    100

    試劑三μl

     

    100

    混勻,37℃水浴30min,1ml玻璃比色皿,對照管調零,測定A460

    酶活性計算公式

    1)按樣本蛋白濃度計算:

    酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量為一個(gè)酶活力單位(U)。

    DAO活性(nmol/min/mg prot= ×V反總÷V×Cpr÷T= 18×A460÷Cpr

    2)按樣本質(zhì)量計算:

    酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

    DAO活性(nmol/min/g= ×V反總÷V÷V樣總×W÷T= 18×A460÷W

    3)按細胞數量計算:

    酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每104個(gè)細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

    DAO活性(nmol/min/104cell= ×V反總÷V÷V樣總×細胞數量)÷T= 18×A460÷細胞數量

     

    (4) 按液體體積計算

    酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

    DAO活性(nmol/min/ml= ×V反總÷V÷T= 18×A460

    ε:氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數:7.5 L/mmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,1ml;V樣:反應中樣本體積,0.25ml;V樣總:加入提取液體積,1ml;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/ml;T:反應時(shí)間,30min

    注意事項

    1、如果OD值小于0.01,適當加大提取用的樣本質(zhì)量; OD值大于0.8,粗酶液可適當稀釋?zhuān)蛘邷p少提取用樣本量。

    2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。

     

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