正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

銅藍蛋白是血漿的含銅蛋白，有運輸銅的功能，同時(shí)具有氧化酶的活性，是細胞外液重要的抗氧化劑。

測定原理：

銅藍蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺生成藍色產(chǎn)物，在645nm處有特征吸收峰，依此可得銅藍蛋白活性。

組成：

試劑三：液體15ml×1瓶，4℃避光保存。（使用前37℃預熱）

自備儀器和用品：

天平、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

測定操作表

1、 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長(cháng)至645nm，蒸餾水調零。

2、 操作表

計算公式:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、 按體積計算

酶活定義:37℃條件下， 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.01為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/ml）=ΔA×V反總÷0.01÷V樣÷T = 33.33×ΔA

2、 按鮮重計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.01÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 33.33×ΔA÷W

3、 按蛋白濃度計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.01÷（Cpr×V樣）÷T = 33.33×ΔA÷Cpr

V樣：0.03 ml；V反總：0.3 ml；T：反應時(shí)間，30min；V樣總：加入提取液體積，1ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

b. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、 按體積計算

酶活定義:37℃條件下， 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.005為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/ml）=ΔA×V反總÷0.005÷V樣÷T = 66.66×ΔA

2、 按鮮重計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.005÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 66.66×ΔA÷W

3、 按蛋白濃度計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個(gè)酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.005÷（Cpr×V樣）÷T = 66.66×ΔA÷Cpr

V樣：0.03 ml；V反總：0.3 ml；T：反應時(shí)間，30min；V樣總：加入提取液體積，1ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項:

試劑二和試劑三有一定的毒性和刺激性，請操作時(shí)做好防護措施。