正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

生物體內巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內具有重要的解毒功能，對生物體的自我調節具有非常重要的生理意義。

測定原理：

巰基基團與5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、可見(jiàn)分光光度計、恒溫水浴鍋、1ml玻璃比色皿、乙醇和蒸餾水。

樣品的制備:

1. 按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2. 血清，培養液：取0.1ml樣本，加入0.4ml提取液，混勻，室溫靜置10min, 然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定操作表：

1、 分光光度計預熱30min，調節波長(cháng)至412nm，雙蒸水調零。

2、 操作表

在1ml玻璃比色皿中加入如下試劑

計算公式：

非蛋白巰基標準曲線(xiàn)：y =3.6222 x- 0.0037，R² = 1，x為標品濃度，單位μmol/ml， y為吸光度ΔA。

1. 組織：

（1）按樣本重量計算

非蛋白巰基含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×V樣總÷W

=0.276×（ΔA+0.0037）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

非蛋白巰基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×V樣總÷Cpr

=0.276×（ΔA+0.0037）÷Cpr

2. 血清、培養液：

非蛋白巰基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×5 ×10³

=1380×（ΔA+0.0037）

V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；5：血清，培養液等液體樣本稀釋倍數；10³ ：1mmol/L=10³μmol/ L

注意事項：

最低檢出限為10μmol/L。