正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

TAL廣泛存在于植物和微生物中，是苯丙氨酸代謝途徑的關(guān)鍵酶之一。TAL能夠躍過(guò)肉桂酸-4-羥基化酶（C4H）直接將酪氨酸轉化為香豆酸，香豆酸可進(jìn)一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素類(lèi)天然產(chǎn)物。

測定原理：

TAL能夠分解酪氨酸產(chǎn)生香豆酸，使反應溶液333nm下的吸光度隨反應時(shí)間而上升，根據吸光度的變化率可計算出TAL活性。

組成：

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5ml蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）果汁等液體樣品：直接檢測。

測定操作表：

1、 分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至333nm，蒸餾水調零。

2、試劑二的配置：臨用前在試劑二瓶中加入15ml試劑一充分溶解待用（用不完的試劑4℃保存一周，注意現配現用），在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。

3、在EP管中依次加入如下試劑

混勻，10000g4℃離心5min，取0.8~1ml上清至1ml石英比色皿，333nm下測定吸光值A測定與A對照，ΔA=A測定-A對照

TAL活性計算：

1、血清（漿）或果汁TAL活性

單位的定義：每分鐘每ml血清（漿）或果汁在每ml反應體系中使333nm處吸光值變化

0.01為一個(gè)酶活力單位。

TAL（U/ml）=ΔA×V反總÷( V樣÷V樣總)÷0.01÷T =17.5×ΔA

2、組織、細菌或細胞TAL活性

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每分鐘每mg組織蛋白在每ml反應體系中使333nm處吸光值變化0.01為一個(gè)

酶活力單位。

TAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =17.5×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

（2）按樣本鮮重計算：

單位定義：每分鐘每g組織在每ml反應體系中使333nm處吸光值變化0.01為一個(gè)

酶活力單位。

TAL（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =17.5×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位定義：每分鐘每1萬(wàn)個(gè)細菌或細胞在每ml反應體系中使333nm處吸光值變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

TAL（U/10⁴ cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =0.035×ΔA

V反總：反應體系總體積，1.05ml；V樣：加入樣本體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時(shí)間，60 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數，500萬(wàn)。