測定意義：

脂質(zhì)過(guò)氧化是動(dòng)植物體內活性氧(ROS)氧化生物膜的過(guò)程，脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）是脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程的產(chǎn)物，即ROS與生物膜的磷脂、酶和膜受體相關(guān)的多不飽和脂肪酸的側鏈及核酸等大分子物質(zhì)起脂質(zhì)過(guò)氧化反應形成LPO，使細胞膜的流動(dòng)性和通透性發(fā)生改變,最終導致細胞結構和功能的改變。因此，LPO常被作為機體氧化應激的一種指標，與某些疾病的病理過(guò)程，如腫瘤、化學(xué)中毒、感染、炎 癥、自身免疫疾病、動(dòng)脈粥樣硬化（AS）及心腦血管疾病，以及衰老等生理過(guò)程密切相關(guān)。

測定原理：

LPO在酸性條件下加熱，產(chǎn)生小分子終產(chǎn)物MDA，MDA與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產(chǎn)物，在535nm有最大吸收峰。

組成：

臨用前注意試劑二是否完全溶解，如未溶解，可以70℃-90℃加熱，并振蕩以促進(jìn)溶解。

自備儀器和用品：

分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

LPO提?。?

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)到535 nm，蒸餾水調零。

2、在EP管中依次加入如下試劑

立即混勻，95℃水浴40min后，流水冷卻。3000g離心10min，吸取1ml上清加入1ml玻璃比色皿，測定535nm下各管吸光值，記作A測定和A空白。ΔA=A測定-A空白。

LPO含量計算：

用玻璃比色皿的計算公式如下

y = 1.1446x - 0.0076，R² = 0.9997，x為標準品濃度μmol/ml，y為吸光度。

1、血清（漿）中LPO含量的計算：

LPO含量(nmol/ ml)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V標÷V樣×1000

=873.6×（ΔA+0.0076）

2、細菌、細胞或動(dòng)物組織中LPO含量計算

（1）按照蛋白濃度計算

LPO含量(nmol/ mg prot)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V標÷(Cpr×V樣)×1000

=873.6×（ΔA+0.0076）÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

（2）按照樣品質(zhì)量計算

LPO含量(nmol/g 鮮重)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V標÷(W ×V樣÷V樣總)×1000

=873.6×（ΔA+0.0076）÷W

 (3 ) 按照細菌或細胞密度計算：

LPO含量(nmol/10⁴)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V標÷(500×V樣÷V樣總)×1000

=1.747×（ΔA+0.0076）

V標：標準曲線(xiàn)中加入標品體積，0.06ml；V樣：加入樣本體積，0.06ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數，500萬(wàn)；1000，μmol到nmol換算系數。