測定意義：

ADH是生物體內短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶，催化乙醇與乙醛可逆轉換，在很多生理過(guò)程中起著(zhù)重要作用。哺乳動(dòng)物ADH主要在肝臟生成，肝臟損傷導致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

測定原理：

ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD⁺，NADH在340nm處有吸收峰，而NAD⁺沒(méi)有；測定340nm 吸光度下降速率，來(lái)計算ADH活性。

組成：

試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存。臨用前加入22ml試劑二，現配現用。

自備儀器和用品：

研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、可調式移液器和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。

2、 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。

3、血清等液體：直接測定。

ADH測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到340 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

3. 在1ml石英比色皿中依次加入100μl樣本上清液、800μl試劑三和100μl試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。

計算公式：

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×10⁹) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×10⁹) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

（3）按細胞數量計算

活性單位定義：25℃中每10⁴個(gè)細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/10⁴cell) =(△A÷ε÷d×V反總×10⁹)÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V反總×10⁹) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε：NADH摩爾消光系數，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，1000μl=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μl=0.1 ml；T：反應時(shí)間，1min。