蔗糖磷酸化酶（SP）檢測試劑盒(分光光度法50T/48S)

貨號	SH0121	售價(jià)（元）	2160
規格	50T/48S	CAS號

貨號	名稱(chēng)	規格
SH0121	蔗糖磷酸化酶（SP）檢測試劑盒(分光光度法50T/48S)	50管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷鍵，催化葡萄糖基轉移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相應的葡萄糖基低聚糖。此外，SP還能催化氫醌合成熊果苷，具有極強的美白效果，在化妝品工業(yè)中具有重要應用。

測定原理：

SP能夠以磷酸為受體，催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖，在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH，導致340nm光吸收值增加。測定340nm吸光度增加速率，即可計算SP活性。

組成：

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存，臨用前加6ml蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存，臨用前加12ml蒸餾水水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1 ml石英比色皿和蒸餾水。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

測定步驟：

1.分光光度計預熱30min，調節波長(cháng)至340nm，蒸餾水調零。

2.操作表

試劑名稱(chēng)	對照管	測定管
試劑一（μl）	600	600
試劑二（μl）	100	100
試劑三（μl）	200	200
樣本（μl）		100
蒸餾水（μl）	100
迅速混勻，于1ml石英比色皿，37℃下測定340nm的初始吸光值與反應2min后的吸光值，測定管記作A₁與A₂，對照管記作A₃與A₄，△A=（A₂- A₁）-（A₄- A₃）。

SP活性計算公式:

1. 按照蛋白濃度計算

酶活定義：37℃，pH6.8時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。

SP活性（nmol/min/mg prot）=×V反總÷V樣÷Cpr÷T=804×△A÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

酶活定義：37℃，pH6.8時(shí)，每克樣本每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。

SP活性（nmol/min/g 鮮重）=×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=804×△A÷W

3. 按照細胞數量計算

酶活定義：37℃，pH6.8時(shí)，每10⁴個(gè)細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。

SP活性（nmol/min/10⁴ cell）=×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量（萬(wàn)個(gè)）)÷T=804×△A÷細胞數量（萬(wàn)個(gè)）

：NADPH摩爾消光系數，6220 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應體系總體積，1ml；V樣：反應體系中樣本體積，0.1ml；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時(shí)間，2min

注意事項:

1. 可選用BCA法測定蛋白含量試劑盒測定蛋白含量。

2. 樣本較多時(shí)，可以按照每個(gè)樣本試劑一：試劑二：試劑三=600：100：200（μl）的比例配制工作液，用多少配多少，臨用前立刻配制，10分鐘內使用。