測定意義：

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過(guò)多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。

測定原理：

GS在ATP和Mg²⁺存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進(jìn)一步轉化為γ─谷氨?；惲u肟酸，在酸性條件下形成的絡(luò )合物在540nm處有最大吸收峰，可用分光光度計測定。

組成：

試劑一臨用前37℃預熱20min，充分混勻，如有沉淀，靜置10min，取上清待用。

試劑二臨用前37℃預熱20min，充分混勻，如有沉淀，靜置10min，取上清待用。

試劑三用時(shí)每瓶加入5ml蒸餾水充分溶解待用。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣本測定的準備：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至540nm，蒸餾水調零。

2、在EP管中加入下列試劑：

  混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）準確水浴30min

混勻，25℃室溫靜置10min后，5000g，25℃離心10min，取上清液測定540nm處的吸光值A。△A=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管需設一個(gè)對照管。

GS活力單位的計算：

標準曲線(xiàn)：y = 0.8348x + 0.0008，R² = 0.9999

1、血清（漿）GS活性

單位定義：每ml血清（漿）在每ml反應體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。

計算公式：

GS（μmol/h/ml）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷V樣÷T=10.268×ΔA

2、組織、細菌或細胞GS活性

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白在每ml反應體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。

GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(Cpr×V樣)÷T

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織在每ml反應體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。

GS（μmol/h/g 鮮重）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T=10.268×ΔA÷W

 （3）按細菌或細胞密度計算

單位定義：每1萬(wàn)個(gè)細菌或細胞在每ml反應體系中每小時(shí)產(chǎn)生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個(gè)酶活力單位。

GS（μmol/h/10⁴ cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷T

=0.021×ΔA

V反總：反應體系總體積，0.75ml； V樣：加入樣本體積，0.175ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wàn)。