正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

還原糖廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養細胞中。植物體內的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等，是最常見(jiàn)的單糖和雙糖，其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物，也是進(jìn)一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。

測定原理：

加熱促進(jìn)堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征吸收峰；在一定的濃度范圍內，還原糖含量與540nm吸光度成線(xiàn)性關(guān)系，根據標準曲線(xiàn)，即可求出樣品中還原糖的量。

組成：

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、蒸餾水。

樣品中還原糖的提?。?/span>

1、細菌或細胞的處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議1000萬(wàn)細菌或細胞加入2ml試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復30次），轉移到有蓋離心管中（防止加熱時(shí)水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。

2、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.2g組織，加入2ml試劑一），冰浴勻漿，轉移到有蓋離心管中（防止加熱時(shí)水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。

3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（ml）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議取0.2ml血清（漿）加入2ml試劑一），冰浴勻漿，轉移到有蓋離心管中（防止加熱時(shí)水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。

測定步驟：

1、 分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至540nm，蒸餾水調零。

2、 調節水浴鍋至95℃。

3、 在EP管中加入下列試劑：

將各管搖勻，在95℃水浴中加熱5min（蓋緊，防止水分散失），取出后立即冷卻至室溫，混勻。在540nm波長(cháng)下讀取對照管和測定管吸光值。計算ΔA=A測定-A對照。每個(gè)測定管需設一個(gè)對照管。

注意：如果ΔA大于2，需要將樣本用試劑一稀釋?zhuān)嬎愎街谐艘韵鄳♂尡稊担ㄈ麸@色后出現分層現象，可改用蒸餾水稀釋?zhuān)?/span>

還原糖含量計算：

1、標準條件下測定回歸方程為y = 8.3796x- 0.3034；x為標準品濃度（mg/ml），y為吸光值。

2、按樣本鮮重計算：

還原糖(μg/g鮮重)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷W

3、按樣本蛋白濃度計算：

還原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷Cpr

4、按細菌或細胞密度計算：

還原糖(μg /10⁴ cell)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（1000×V1÷V2）=0.239×(ΔA＋0.3034)

5、按血清（漿）體積計算：

還原糖(μg/ml)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（V3×V1÷V2）=1193.4×(ΔA＋0.3034)

1000：1mg/ml=1000μg/ml；V1：加入樣本體積，0.7ml；V2：加入提取液體積，2 ml；V3：加入血清（漿體積），0.2ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；1000：細菌或細胞總數，1000萬(wàn)。

注意：最低檢測限為1mg/g鮮重或10μg/mg prot