測定意義：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱(chēng)為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)堿的原料細胞壁以及β+葡聚糖，降低釀造堿物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料堿的非淀粉多糖，促進(jìn)營(yíng)養物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)堿，BAX一般分離自最適生長(cháng)pH為9 +11的微生物。

測定原理：

BAX在堿性環(huán)境堿催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5+二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過(guò)測定反應液在540nm吸光值增加速率，可計算BAX活力。

組成：

試劑一：液體10ml×1瓶，4℃避光保存。（若出現白色絮狀或顆粒狀沉淀，可60℃加熱溶解后使用）。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

粗酶提?。?/span>

1. 發(fā)酵液：發(fā)酵液于8000g，4℃，離心15min，取上清，作為待測樣品。

2. 酶干粉：稱(chēng)約0.1mg，加1ml緩沖液溶解待測。

3. 組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml緩沖液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心10min，取上清待測。

測定操作表：

1、 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長(cháng)至540nm。

2、 操作表

BAX計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y = 2.8432x - 0.0293，R² = 0.9985

1. 按液體體積活力計算：

酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力（nmol/min/ml）= （ΔA+0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數×10⁶

= 391× (ΔA+0.0293)

2. 按蛋白濃度計算：

酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數×10⁶÷Cpr

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

3. 按鮮重計算：

酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數×10⁶÷W

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W

150：木糖的分子量；T：反應時(shí)間，30min；稀釋倍數=V反總÷V樣=300μL÷60μL=5；

10⁶：轉化因子，即1mg/ml=10⁶ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y = 1.4216x - 0.0293，R² = 0.9985

1. 按液體體積活力計算：

酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力（nmol/min/ml）= （ΔA+0.0293）÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數×10⁶

= 782× (ΔA+0.0293)

2. 按蛋白濃度計算：

酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.0293）÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數×10⁶÷Cpr

= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

3. 按鮮重計算：

酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA +0.0293）÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數×10⁶÷W

= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷W

150：木糖的分子量；T：反應時(shí)間，30min；稀釋倍數=V反總÷V樣=300μL÷60μL=5；

10⁶：轉化因子，即1mg/ml=10⁶ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項：

1. 吸光度變化應該控制在0.01～0.8之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變；也可以延長(cháng)或者縮短反應時(shí)間。

2. 試劑盒2+8℃保存，保質(zhì)期3個(gè)月，建議盡快使用。