測定意義：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類(lèi)半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè)，比傳統的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應用價(jià)值。

測定原理：

β-木糖苷酶催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯酚，對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰，測定405nm光吸收增加速率，可計算β-木糖苷酶活性。

組成：

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min，取上清待測。

細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

液體：直接檢測。

測定操作表：

1、 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長(cháng)至405nm。

2、 操作表

β-木糖苷酶活性計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y=13.226x+0.0011，R²=0.9998；x為標準品濃度（μmol/ml），y為吸光值ΔA。

1、按蛋白濃度計算

酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每毫克蛋白1min內催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷（V樣×Cpr）÷T×1000

                            = 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按樣本質(zhì)量計算：

酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每克樣品1min內催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按細胞數量計算：

酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每10⁴個(gè)細胞1min內催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/10⁴cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量（萬(wàn)個(gè)）÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數量（萬(wàn)個(gè)）

（4）按液體體積計算

酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每毫升液體1min內催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ ml）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣÷T×1000

                            =11.34×(ΔA-0.0011)

V樣總：加入提取液體積，1ml； V反總：反應總體積，0.12ml；V樣：反應中樣品體積，0.04ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應時(shí)間，20min；1000:1μmol/L=1000nmol/L

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y=6.613x+0.0011，R²=0.9998；x為標準品濃度（μmol/ml），y為吸光值ΔA

1、按蛋白濃度計算

酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每毫克蛋白1min內催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷（V樣×Cpr）÷T×1000

                            = 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按樣本質(zhì)量計算：

酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每克樣品1min內催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按細胞數量計算：

酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每10⁴個(gè)細胞1min內催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/10⁴cell）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量（萬(wàn)個(gè)）÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數量（萬(wàn)個(gè)）

（4）按液體體積計算

酶活定義：45℃，pH7.4時(shí)每毫升液體1min內催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ ml）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷V樣÷T×1000

                            =22.68×(ΔA-0.0011)

V樣總：加入提取液體積，1ml； V反總：反應總體積，0.12ml；V樣：反應中樣品體積，0.04ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應時(shí)間，20min；1000:1μmol/ml=1000nmol/ml

ΔA控制在0.01-1范圍內，若ΔA大于1，可適當減小樣本量。

標準曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍為：0.01μmol/ml-0.5μmol/ml。