正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

6PG (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又稱(chēng)6-磷酸葡萄糖)，是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產(chǎn)物，廣泛存在于動(dòng)植物體和微生物中。在糖酵解的第一步反應中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通過(guò)磷酸葡萄糖異構酶的催化形成果糖-6-磷酸，以繼續糖酵解的其它步驟；而在戊糖磷酸途徑中，葡萄糖-6-磷酸是其第一個(gè)底物，該過(guò)程也是生成NADPH的主要途徑。此外，葡萄糖-6-磷酸也能轉化形成糖原或淀粉而被儲存起來(lái)。

測定原理：

6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化6PG和NADP⁺生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH，NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色，在450 nm下測定吸光值。

組成：

自備儀器和用品：

酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。

6PG提?。?

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）， 8000g，25℃離心10min，取上清待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，25℃離心10min，取上清待測。

3、血清（漿）等液體樣品：直接測定。

測定步驟：

1、酶標儀預熱30min以上，調節波長(cháng)至450nm。

2、試劑二的配制：臨用前加入3ml水充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存；

3、工作液的配制：臨用前按照樣本數量，按以下比例配制工作液

樣本測定

按下表在96孔板中加入如下試劑

37℃避光孵育30min，450nm下測定吸光值A測定與A對照，△A=A測定-A對照。每個(gè)測定管需設一個(gè)對照管。

6PG含量計算：

1、標準條件下測定回歸方程為y = 3.8589x - 0.0016，R² = 0.997； x為6PG含量（μmol/ml），y為吸光值。

2、按照血清（漿）體積計算

6PG含量（nmol/ml）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷V1×1000

=259.1×(△A+0.0016)

3、按照蛋白濃度計算

6PG含量（nmol/mg prot）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(V1×Cpr)×1000

=259.1×(△A+0.0016) ÷Cpr

4、按照樣品質(zhì)量計算

6PG含量（nmol/g鮮重）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(W ×V1÷V2）×1000

=259.1×(△A+0.0016) ÷W

3、按照細菌或細胞密度計算

6PG含量（nmol/10⁴ cell）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷（500×V1÷V2）×1000

=0.518×(△A+0.0016)

V1：加入反應體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1 ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wàn)；1000，μmol到nmol的換算系數。