測定意義：

線(xiàn)粒體是半自主性細胞器，不僅是細胞內氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要場(chǎng)所，為細胞的活動(dòng)提供能量，而且在許多生命活動(dòng)中具有重要調控作用。因此，準確和全面分離保持正?；钚缘木€(xiàn)粒體已經(jīng)成為許多研究的前提。

測定原理：

利用專(zhuān)門(mén)試劑溫和勻漿組織和細胞，再采用差速離心法從勻漿中分離完整線(xiàn)粒體；利用專(zhuān)門(mén)試劑，配合超聲波破碎線(xiàn)粒體，可以得到保持活性的線(xiàn)粒體酶。

試劑的組成和配制：

需自備的儀器和用品：

超聲波破碎儀、臺式離心機、可調式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

提取步驟：

1、準確稱(chēng)取約0.1g組織或收集約500萬(wàn)細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑四，用冰浴勻漿器或研缽研磨。

2、4 ℃ 600 g離心5min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心10min。

4、上清液即胞漿提取物，可用于研究線(xiàn)粒體蛋白向胞漿的釋放。

5、沉淀為完整線(xiàn)粒體。含有完整的內膜和外膜，并具有線(xiàn)粒體的生理功能?？捎糜诰€(xiàn)粒體的生理功能等方面的研究。

6、在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑四，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），可用于線(xiàn)粒體酶活性測定。

7、在沉淀中加入200uL試劑三和2uL 試劑四，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），可用于線(xiàn)粒體蛋白濃度測定。

注意事項

1、 分離線(xiàn)粒體和提取線(xiàn)粒體蛋白質(zhì)的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行，所用溶液需冰浴或4℃預冷。

2、 通常在分離線(xiàn)粒體時(shí)前后兩次離心速度選取600g和11,000g，如果希望純度更高，但對線(xiàn)粒體的得率要求不高，前后兩次離心速度可以采用1000g和3500g。

3、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。