測定意義：

蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫”器官運輸的主要形態(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其合成方向SS-Ⅱ的活性對于植物蔗糖合成具有重要意義。

測定原理：

SS-Ⅱ催化游離果糖與葡萄糖供體UDPG反應生成蔗糖，蔗糖與間苯二酚反應可呈現顏色變化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。

組成：

試劑二：1000μg/ml蔗糖溶液10ml×1瓶，4℃保存；

試劑五：液體6ml×1瓶，4℃避光保存；

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰

樣品測定的準備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、 分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至480nm，蒸餾水調零。

2、 樣本測定(在EP管中加入下列試劑）：

混勻，25℃準確水浴10min

沸水浴中煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分散失），冷卻

混勻，沸水浴30min，冷卻后，取200μl 至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下測定各管吸光值。標準管和空白管只要做一管。每個(gè)測定管需要設一個(gè)對照管。

SS-Ⅱ活性計算

1、按照蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C標準管×V1×（A測定管-A對照管)÷（A標準管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A測定管-A對照管)÷（A標準管-A空白管)÷Cpr

2、按照樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/g鮮重) = C標準管×V1×（A測定管-A對照管)÷（A標準管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A測定管-A對照管)÷（A標準管-A空白管)÷W

C標準管：標準管濃度，1000μg/ml；V1：加入反應體系中樣本體積，0.01ml； V2：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；T ：反應時(shí)間：10min。