測定意義：

FDA水解反應能很好的反應土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統中有機質(zhì)的轉化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標之一。

測定原理：

FDA是一種無(wú)色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩定不易被分解，并在490nm處有強吸收峰，通過(guò)檢測490nm處的吸光值變化可計算得FDA水解酶活性。

試劑組成和配制：

試劑二：粉劑1瓶，-20℃避光保存，臨用前加4ml試劑三溶解。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋

樣本處理：

稱(chēng)取風(fēng)干過(guò)30-50目篩土壤約0.1g，備用。

測定操作表：

充分混勻，30℃，震蕩1h

10000g，25℃，離心5min，取200μl上清于微量石英比色皿/96孔板中測定490nm處吸光值A，△A1=A標準管-A空白管，△A2=A測定管-A對照管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

酶活性計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。

FDA活性（μmol/d/g）=（△A2÷△A1×C標準品）×V反總÷W

                    = 0.96×（△A2÷△A1）÷W

b. 用96孔板測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。

FDA活性（μmol/d/g）=（△A2÷△A1×C標準品）×V反總÷W

                    = 0.96×（△A2÷△A1）÷W

C標準品：標準品濃度100μmol/L；V反總：反應總體積，0.4ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項:

1、盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準確反映酶的活性。

2、測定之前進(jìn)行預實(shí)驗，若吸光值較高，請進(jìn)行適當的稀釋再測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數。