測定意義：

土壤磷酸酶是一類(lèi)催化土壤有機磷化合物礦化的酶，其活性的高低直接影響著(zhù)土壤中有機磷的分解轉化及其生物有效性，是評價(jià)土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著(zhù)影響。通常按照其最適pH范圍，分為堿性、中性和酸性三種類(lèi)型磷酸酶。

測定原理：

堿性環(huán)境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過(guò)測定酚的生成量即可計算出S-AKP/ALP活性。

試劑組成和配制：

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。用前加50ml蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1152μl無(wú)水乙醇（自備），48 μl蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）。

標準品：液體×1瓶，0.5μmol/ml苯酚標準液，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計、臺式離心機、37℃恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、冰、蒸餾水、無(wú)水乙醇和甲苯。

催化反應：

稱(chēng)取風(fēng)干混勻土壤約0.1g，加入50μl甲苯（自備），輕搖15min；加400μl試劑一并且搖勻后，置于37℃恒溫培養箱，開(kāi)始計時(shí)，催化反應24h；到時(shí)后迅速加入1ml試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應。8000g，25℃離心10min，取上清液置于冰上待測。

顯色反應：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到660 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取1ml玻璃比色皿，加入50 μl蒸餾水，100 μl試劑三，20 μl試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830 μl，混勻后25℃靜置30 min，于660 nm測定吸光度，記為A空白管。

3. 標準管：取1ml玻璃比色皿，加入50 μl標準液，100 μl試劑三，20 μl試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830 μl，混勻后25℃靜置30 min，于660 nm測定吸光度，記為A標準管。

4. 測定管：取1ml玻璃比色皿，加入50 μl上清液，100 μl試劑三，20 μl試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830 μl，混勻后25℃靜置30 min，于660 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意事項：

空白管和標準管只需測定一次。

S-ALP活性計算公式：

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放1μmol酚為1個(gè)酶活單位。

S-AKP/ALP（μmol/d/g土樣）=[C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總÷W÷T

= 0.725×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)÷W

C標準液：0.5μmol/ml；V總：催化體系總體積，1.45ml；W：土壤樣品質(zhì)量，g；T：催化反應時(shí)間，24 h=1 d。