測定意義：

磷是植物必需大量元素。植物主要通過(guò)根系從土壤中獲取磷元素。土壤磷包括有機磷和無(wú)機磷。土壤有機磷經(jīng)過(guò)礦化分解而轉化為無(wú)機磷，才能進(jìn)一步被植物吸收利用。

測定原理：

從土壤中提取無(wú)機磷，在酸性環(huán)境中，通過(guò)鉬藍法定磷，即可計算出無(wú)機磷含量。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋10倍后再用；

試劑三：粉劑×1瓶， 4℃避光保存。臨用前配制，加入20 ml蒸餾水，充分溶解后加入10 ml試劑二，混勻；

標準品：液體×1支，20 μmol/L無(wú)機磷標準液，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計、臺式離心機、可調式水浴鍋，分析天平、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、蒸餾水和100目篩子。

土壤無(wú)機磷提?。?/span>

取10 ml離心管，加入精確稱(chēng)取的100目篩子過(guò)篩的風(fēng)干土樣約0.1g，加入10 ml提取液，震蕩混勻，然后置于40℃水浴浸提1 h，8000g，25℃，離心10min，取上清液，待測。

測定步驟：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到660 nm，蒸餾水調零。

2.打開(kāi)水浴鍋，調節溫度到40℃。

3. 空白管：取EP管，依次加入500μl蒸餾水，500μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，依次加入50μl標準液，450μl蒸餾水，500μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 測定管：取EP管，依次加入50μl上清液，450μl蒸餾水，500μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A測定管。

需在40min內完成比色。

土壤無(wú)機磷含量計算公式：

S-PHOS（nmol/d /g干重）= [C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總÷W

= 200×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)÷W

C標準液：20 μ mol/L；V總：總上清液體積，10 ml=0.01 L；W：土壤樣品質(zhì)量，g。

注意事項：

1、空白管和標準管只需測定一次。

2、試劑三需臨用前配制，限當天使用。試劑三配制過(guò)程中，可能會(huì )產(chǎn)生黑色固體，其不影響結果，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入。

3、40min內完成比色。