測定意義：

土壤亞硝酸還原酶是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一，參與亞硝酸鹽至NO的還原反應，它的活性反映了生物降解過(guò)程中氮素的轉化效率，為氮素轉化規律的研究提供一定的依據。

測定原理：

亞硝酸還原酶可將NO₂^—還原為NO，使樣品中參與重氮化反應生成紫紅色化合物的NO₂^—減少，即540nm處吸光值的變化可反應土壤中亞硝酸還原酶的活性。

試劑的組成和配制：

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加10ml蒸餾水溶解。

試劑三：液體10ml×1瓶，4℃保存。（如出現沉淀可以70-80℃加熱溶解；

試劑四：液體25ml×1瓶，4℃避光保存。（如出現沉淀可以70-80℃加熱溶解；

工作液：臨用前根據用量將試劑四和試劑五以1:1的比例混合。

自備儀器和用品：

天平、可見(jiàn)分光光度計、水浴鍋、低溫離心機、1ml玻璃比色皿。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。

測定操作表：

計算公式：

標準曲線(xiàn)：y = 1.5562x+ 0.0088，R² = 0.996；x為標準品濃度（μmol/ml），y為吸光值（A標準管-A空白管）。

酶活單位定義：每g土樣每天還原1μmol NO₂^ˉ 的量為一個(gè)酶活力單位。

S-NiR（μmol /d /g土樣）=[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088] ×V標÷1.5562÷W÷T

= 3.084×[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷W

T：反應時(shí)間，1h=1/24d；V標：標準液體積，0.2ml； W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項：

1. 配制好的工作液3天內使用完。

2. 若吸光值超過(guò)3，將上清液進(jìn)行適當的稀釋后再加入工作液顯色，并在計算公式中乘以稀釋倍數。

3. 嚴格控制顯色時(shí)間，否則會(huì )對結果有影響。

4. 標準曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍為0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。

5. A空白管-（A測定管-A對照管）線(xiàn)性范圍為0.02-3。