土壤羥胺還原酶（HR）檢測試劑盒（微量法100T/48S）

貨號	SH0384	售價(jià)（元）	1800
規格	100T/48S	CAS號

貨號	名稱(chēng)	規格
SH0384	土壤羥胺還原酶（HR）檢測試劑盒（微量法100T/48S）	100T/48S

正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過(guò)程中形成的中間產(chǎn)物羥胺還原為氨，土壤中的還原態(tài)化合物可作為氫的供體，其強弱影響到土壤氮代謝過(guò)程中氮素的氨揮發(fā)損失，間接影響氮肥的利用效率。

測定原理：

硫酸鐵銨中的Fe³⁺可將羥胺氧化為氮氣，自身被還原為Fe²⁺，Fe²⁺在弱酸條件下與鄰菲羅琳形成橙紅色配合物，在510nm處有吸收峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使配合物形成量減少，510nm處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性。

試劑組成和配制：

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加4ml蒸餾水充分溶解。

自備儀器和用品：

天平、常溫離心機、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀、氮吹儀。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50 目篩。

測定操作表：

	空白管	對照管	測定管
風(fēng)干土樣（g）		0.02	0.02
試劑一（μl）	40		40
蒸餾水（μl）		40
試劑二（μl）	40	40	40
混勻后，用N₂氣流排除管中空氣，立即密封，于30℃反應1h
試劑四（μl）	80	80	80
充分震蕩10min，8000rpm，25℃，離心10min
上清液（μl）	20	20	20
試劑五（μl）	40	40	40
試劑六（μl）	20	20	20
試劑七（μl）	20	20	20
蒸餾水（μl）	100	100	100
充分混勻，25℃靜置顯色10min，用蒸餾水調零，于微量石英比色皿/96孔板測定510nm各管吸光值，分別記為A空白管、A標準管、A對照管、A測定管，△A＝A空白管－（A測定管－A對照管）。

計算公式：

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y = 0.185x -0.1828，R² = 0.9992

酶活定義：每克土壤每天轉化1μg羥胺為一個(gè)酶活力單位。

HR活性（μg/d /g土樣）=（△A+ 0.1828）÷ 0.185×V反總÷W÷T

= 36.32×（△A+0.1828）÷W

b. 使用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y = 0.0925x -0.1828，R² = 0.9992

酶活定義：每克土壤每天轉化1μg羥胺為一個(gè)酶活力單位。

HR活性（μg/d /g土樣）=（△A+ 0.1828）÷ 0.0925×V反總÷W÷T

=72.64×（△A+0.1828）÷W

V反總：加入提取液體積，0.28ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：1/24h

注意事項：

1. 土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應取表層5cm以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。

2. 試劑三盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。

3. 反應體系最好能用氮吹儀排除溶解氧，若無(wú)此裝置，則加入試劑三后立即密封，于30℃反應1h。