測定意義：

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無(wú)脊椎動(dòng)物、豆類(lèi)的芽等植物中也存在催化單胺類(lèi)物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO活性異常導致細胞內單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)運轉出現紊亂，從而引發(fā)多種病癥。

測定原理：

MAO催化單胺類(lèi)底物脫氨生成相應的醛，進(jìn)一步氧化成酸；底物在360nm處有特征吸收峰，測定360nm光吸收下降的速率，計算MAO活性。

試劑組成和配制：

需自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、稱(chēng)取約0.1g樣品，加1 ml預冷的提取液一充分冰浴勻漿，1000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉移到另一預冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1ml預冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預冷的1ml 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定）。

2、細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉移到另一預冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1.0 ml預冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預冷的1.0 ml 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定），取上清置于冰上待測。

3、血清：直接測定。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至360nm，蒸餾水調零。

2、操作表：

混勻，于微量石英比色皿/96孔板，對照管調零，測定360nm處吸光值A1，然后37℃水浴60min，對照管調零，測定360nm處吸光值A2。ΔA=A1-A2 注意：空白管只需測定一次。

MAO活性計算公式：

a．用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、按蛋白含量計算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（nmol/min / mg prot）= ×V反總÷（V樣× Cpr）÷T= 114×ΔA÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計算：

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每克樣品1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（nmol/min / g 鮮重）=×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T = 114×ΔA÷ W

3、按照細胞數量計算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每104個(gè)細胞1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（nmol/min / 104 cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量）÷T

= 114×ΔA÷細胞數量

4、按照液體體積計算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每升血清1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（nmol/min /L）=×V反總÷V樣=114×ΔA

ε：底物摩爾消光系數，1460L /mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，0.2ml；V樣：反應中樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；T：反應時(shí)間，60min，W：樣本質(zhì)量，g

a．用96孔板測定的計算公式如下

1、按蛋白含量計算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（nmol/min / mg prot）= ×V反總÷（V樣× Cpr）÷T= 228×ΔA÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計算：

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每克樣品1min內轉化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（nmol/min / g 鮮重）=×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T = 228×ΔA÷ W

3、按照細胞數量計算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每104個(gè)細胞1min內轉化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（nmol/min / 104 cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量）÷T

= 228×ΔA÷細胞數量

4、 按照液體體積計算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每升血清1min內轉化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（nmol/min /L）=×V反總÷V樣=228000×ΔA

ε：底物摩爾消光系數，1460L /mol /cm； d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應總體積，0.2ml；V樣：反應中樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；T：反應時(shí)間，60min，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

吸光度變化應該控制在0.01～0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變。