測定意義：

甜菜堿是一種廣泛分布于動(dòng)植物及微生物體內的季銨型水溶性生物堿，是生物體內膽堿的氧化產(chǎn)物，可以增強免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進(jìn)動(dòng)物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進(jìn)食欲、緩和應激、調節滲透壓、穩定維生素等多種生物作用，在化工、醫藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應用。

測定原理：

甜菜堿在強酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在525nm處有特征吸收峰，測定525nm處的吸光值，可計算得樣品的甜菜堿含量。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×3瓶，4℃保存；臨用前根據用量配制，每瓶加20ml蒸餾水溶解，加390μl濃鹽酸調pH為1。

試劑二：99%乙醚，自備。取無(wú)水乙醚59.4ml，加入蒸餾水0.6ml，混勻。

試劑三：70%丙酮，自備。（易揮發(fā)，根據用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）

自備儀器和用品：

天平、離心機、酶標儀、96孔板、乙醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。

甜菜堿提?。?/span>

取烘干后過(guò)40目篩的樣品約0.02g，加0.8ml水，置于60℃提取30min，期間不斷震蕩。再加入200μl提取液，混勻后10000g，25℃，離心10min，取上清液。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至525nm，蒸餾水調零。

2、操作表

充分混勻，4℃中反應2h，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清

混勻，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清。置于通風(fēng)櫥使殘余乙醚自然揮發(fā)干凈

震蕩使沉淀充分溶解，取200μl于96孔板，記錄標準管和測定管525nm處吸光值A測定與A空白。ΔA=A測定管-A空白管。

注意事項：

1、試劑一配制時(shí)pH嚴格控制為1，否則會(huì )導致反應不完全，配制后4℃只能穩定幾個(gè)小時(shí)，配制后盡快使用。

2、試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護工作。

甜菜堿含量計算公式：

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.502x + 0.0057，R² = 0.9993；x為甜菜堿濃度（mg/ml），y為吸光值。

甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷ 0.502× V標準÷(V樣÷V樣總×W) =1.99×（ΔA-0.0057）÷W

V標準：標準品體積，0.3ml；V樣：反應中樣本體積，0.3ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g