測定意義：

LOX廣泛存在于動(dòng)植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應，導致膜脂過(guò)氧化。在生物體的生長(cháng)發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過(guò)程中具有重要作用。

測定原理：

LOX催化亞油酸氧化，氧化產(chǎn)物在280nm處有特征吸收峰；測定280nm吸光度增加速率，來(lái)計算LOX活性。

組成：

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。

測定：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到280nm，蒸餾水調零。

2. 在試劑三中加入25ml試劑二（振蕩混勻1min），在30℃水浴中預熱10 min以上。用不完的試劑4℃保存。

3. 對照管：依次在1ml石英比色皿中加入100μl樣本和900μl試劑二，30℃反應30min后，記錄A對照。

4. 測定管：依次在1ml石英比色皿中加入100μl樣本和900μl試劑三，30℃反應30min后，記錄A測定。

5. ΔA=A測定-A對照

LOX活性計算公式：

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.01個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。

LOX (U/mg prot) =ΔA×V反總÷(Cpr×V樣)÷T×100

= 33.33×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化0.01個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。

LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T×100

= 33.33×ΔA÷W

Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml，需另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μl=0.1ml；V反總：反應總體積，1ml；V樣總：上清液總體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時(shí)間，30min。