正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

脂蛋白酯酶是脂肪細胞、心肌細胞、骨骼肌細胞、乳腺細胞及巨噬細胞等實(shí)質(zhì)細胞合成的一種酶，可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯，以供組織氧化供能和貯存，并在不同的組織表現出不同的生理意義。

測定原理：

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

天平、冷凍離心機、研缽、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。

樣品處理：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1ml試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。

2. 細胞：按照細胞數量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1ml試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。

3. 血清：直接測定。

測定操作：

計算公式：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y= 0.0581x -0.0169，R²=0.9982

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.0581×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 17.21×（△A+0.0169）÷Cpr

2．按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/g 鮮重）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 17.21×（△A+0.0169）÷W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每10⁴個(gè)細胞每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/10⁴ cell）= （△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

                                        = 17.21×（△A+0.0169）÷細胞數量

4．按照液體體積計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/ml）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷V樣÷T

                                 = 17.21×（△A+0.0169）

V反總：反應總體積，0.2ml；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時(shí)間，10min

b．用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y= 0.029x -0.0169，R²=0.9982

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.029×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 34.42×（△A+0.0169）÷Cpr

2．按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/g 鮮重）=（△A+0.0169）÷0.029×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 34.42×（△A+0.0169）÷W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每10⁴個(gè)細胞每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/10⁴ cell）= （△A+0.0169）÷0.029×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

                                        =34.42×（△A+0.0169）÷細胞數量

4．按照液體體積計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/ml）=（△A+0.0169）÷0.029×V反總÷V樣÷T

                                 = 34.42×（△A+0.0169）

V反總：反應總體積，0.2ml；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時(shí)間，10min

注意事項：

1. 試劑三加入混勻后靜置兩分鐘立即測定，否則影響吸光值。

2. 吸光值過(guò)高或者測定結果不穩定，則將酶液進(jìn)行適當的稀釋?zhuān)⒃谟嬎愎街谐艘韵♂尡稊怠?/span>