測定意義：

GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細胞質(zhì)內。GST是體內解毒酶系統的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達到將體內各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著(zhù)重要的生物學(xué)功能。此外，因為GST具有GSH-Px活性，亦稱(chēng)為non-Se GSH-Px，具有修復氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。

測定原理：

GST催化GSH與CDNB結合，其結合產(chǎn)物的光吸收峰波長(cháng)為340nm；通過(guò)測定340nm波長(cháng)處吸光度上升速率，即可計算出GST活性。

組成：

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5 ml蒸餾水溶解。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1ml石英比色皿和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3.  血清等液體：直接測定。

測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到340 nm，用蒸餾水調零。

2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）保溫。

3. 測定管：取1ml石英比色皿，加入100μl上清液，900μl試劑二和100μl試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。

GST活性計算公式：

(1). 按蛋白濃度計算

活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結合為1個(gè)酶活單位。

GST（nmol/min/mg prot）=(A2－A1))÷ε÷d×10⁹×V反總÷(Cpr×V樣)÷T

=230×((A2-A1) ÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣品每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結合為1個(gè)酶活單位。

GST（nmol/min/g鮮重）=(A2-A1)÷ε÷d×10⁹×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=230×(A2-A1) ÷W

（3）按細胞數量計算

活性單位定義：在25℃或者37℃中，每10⁴個(gè)細胞每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結合為1個(gè)酶活單位。

GST（nmol/min/10⁴ cell）=(A2-A1)÷ε÷d×10⁹×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=230×(A2-A1) ÷細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結合為1個(gè)酶活單位。

GST（nmol/min/ml）=(A2-A1)÷ε÷d×10⁹×V反總÷V樣÷T

                   = 230×(A2-A1)

ε：產(chǎn)物摩爾消光系數，9.6×10³ L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V反總：反應體系總體積，1100μl=0.0011 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μl=0.1 ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應時(shí)間（min），5min。

注意事項：

1. 樣品處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當日測定酶活力；

2. 細胞中GST活性測定時(shí)，細胞數目須在300萬(wàn)-500萬(wàn)之間，細胞中GST的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞；

3. 本法測定GST活性的線(xiàn)性范圍可達76 μmol/min /L，測定前先用1～2個(gè)樣做預實(shí)驗，如5min內反應不成線(xiàn)性，須對樣品用蒸餾水稀釋?zhuān)嬎憬Y果乘以稀釋倍數；

4. 測定反映的溫度對測定結果有影響，請控制在25℃或者37℃（哺乳動(dòng)物）。