測定意義：

無(wú)機磷主要指磷酸根，參與生物體內多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等，此外促進(jìn)碳水化合物的合成、轉化和轉運。

測定原理：

鉬藍與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì)，通過(guò)測定660nm光吸收可計算無(wú)機磷含量。

組成：

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入20 ml蒸餾水，充分溶解后加入試劑二（全部），混勻。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計、離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1ml玻璃比色皿和蒸餾水。

無(wú)機磷提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到660 nm，蒸餾水調零。

2. 打開(kāi)水浴鍋，調節溫度到40℃。

3. 空白管：取EP管，依次加入500μl蒸餾水，500μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，依次加入50μl標準液，450μl蒸餾水，500μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 測定管：取EP管，依次加入50μl上清液，450μl蒸餾水，500μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

組織無(wú)機磷含量計算公式：

（1） 按照蛋白含量計算

無(wú)機磷含量(μmol/mg prot)= [C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總÷Cpr

=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)÷Cpr

（2） 按照樣本質(zhì)量計算

無(wú)機磷含量(μmol/g )= [C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總÷W

=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)÷W

C標準液：1mmol/L；V總：上清液總體積，1ml=0.001 L；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項：

1. 試劑三需臨用前配制，并且當天使用完畢。

2. 40min內完成比色。

3. 最低檢出限為10μmol/L。