測定意義：

胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時(shí)也會(huì )引起胃蛋白酶分泌的減少。

測定原理：

胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應后顯藍色；一定范圍內，其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。

組成：

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入25 ml試劑二充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入25 ml蒸餾水充分溶解。

試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入30 ml蒸餾水充分溶解。

標準品：液體1.26ml×1支，0.5 μ mol/ml酪氨酸標準溶液濃度4℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。

測定步驟：

1.分光光度計預熱30min，調節波長(cháng)到580 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三和試劑四置于37℃水浴預熱30min。

3. 標準管：取玻璃比色皿，加入100μL標準品，200μL試劑二，600μL試劑五，100μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A標準管。

4. 空白管：取玻璃比色皿，加入100μL蒸餾水，200μL試劑二，600μL試劑五，100μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A空白管。

5. 對照管：取EP管，加入500 μL蒸餾水，置于37℃水浴保溫10min；加入500μL試劑四，蓋緊后搖勻1min；加入100μL粗酶液，混勻后8000g 4℃離心10分鐘取上清；在玻璃比色皿中加入上清液100μL，再加入200μL試劑二，600μL試劑五，100μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A對照管。

6. 測定管：取EP管，加入100μL粗酶液，500 μL試劑三，置于37℃水浴保溫10min；加入500μL試劑四，蓋緊后搖勻1min；8000g 4℃離心10分鐘取上清；在玻璃比色皿中加入上清液100μL，再加入200μL試劑二，600μL試劑五，100μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需要測定一次。

計算公式：

(1) 按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位。

胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×稀釋倍數÷（Cpr×V1）÷T=5500×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷Cpr

C標準品：標準品濃度，0.5 μ mol/ml酪氨酸；稀釋倍數：（100+500+500）÷100=11；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定；V1：加入反應體系中粗酶液體積（ml），100μl=0.1 ml；T：催化反應時(shí)間（min），10min。

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位。

胃蛋白酶活性（nmol/min/g鮮重）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×稀釋倍數÷（W×V1÷V2）÷T=5500×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷W

C標準品：標準品濃度，0.5 μ mol/ml酪氨酸；稀釋倍數：（100+500+500）÷100=11；W：組織質(zhì)量（g）；V1：加入反應體系中粗酶液體積（ml），100μl= 0.1 ml；V2：粗酶液總體積（ml），1ml；T：催化反應時(shí)間（min），10min。

注意事項:

試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制，配制好用不完的試劑4℃可保存一周。