測定意義：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測定原理：

強堿性溶液中，雙縮脲與CuSO₄形成紫色絡(luò )合物；紫色絡(luò )合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)，故可用來(lái)測定蛋白質(zhì)含量。該方法測定范圍為1~10mg蛋白質(zhì)，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品，尤其是動(dòng)物材料。

組成：

標準品：液體1ml×1瓶，5 mg/ml，4℃保存。

自備儀器和用品：

離心機、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取提?。?/span>

1、液體樣品：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測定。

2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液（自備，根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））

冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動(dòng)物樣品常常需要稀釋?zhuān)?/span>

3 、細菌、真菌：按照細胞數量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節波長(cháng)到540 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取0.5mL EP管，加入40μl蒸餾水，200μl試劑一，混勻后室溫靜置15 min，取200μl于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A空白管。

3. 標準管：取0.5mL EP管，加入40μl標準液，200μl試劑一，混勻后室溫靜置15 min，取200μl于微量玻璃比色皿/96孔板，540 nm比色，記為A標準管。

4. 測定管：取0.5mL EP管，加入40μl待測液，200μl試劑一，混勻后室溫靜置15 min，取200μl于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

樣品中蛋白質(zhì)濃度計算公式:

C待測（mg/ml）= C標準管×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)

                =5×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)

注意事項:

1.樣品蛋白濃度須在1～10mg/ml范圍內，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml須做相應稀釋。因此測定前用1～2個(gè)樣做預實(shí)驗，確保蛋白濃度在1～10mg/ml范圍內。

2.待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾，提取液中應不含這些物質(zhì)；否則改用BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。