冷凍保存哺乳動(dòng)物細胞在生物學(xué)研究中非常有價(jià)值和普遍。為了防止技術(shù)原因（培養操作）使細胞污染或物理原因（培養箱故障）使長(cháng)期培養功虧一簣。此外，長(cháng)期多次的培養和傳代，導致細胞在遺傳學(xué)性狀上的老化和分化都是促使在接收或生成新細胞系后首要考慮的最佳策略就是凍存細胞。低溫凍存對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要。細胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時(shí)，細胞內的酶活性均己停止，即代謝處于完全停止狀態(tài)，故可以長(cháng)期保存。細胞低溫保存的關(guān)鍵，在于通過(guò)0℃到-20℃階段的處理過(guò)程。在此溫度范圍內，冰晶呈針狀，極易招致細胞的嚴重損傷。

如何減少或者避免冰晶形成，如同凍存細菌時(shí)用的甘油，DMSO（二甲基亞砜）是一種滲透性保護劑，能夠降低細胞冰點(diǎn)，減少冰晶的形成，減輕自由基對細胞損害，改變生物膜對電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性。凍存液中加入后可以使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內的水分逐漸透出，從而減少了冰晶的形成，從而避免細胞的損傷。這就是為什么低溫凍存細胞時(shí)為什么要采用慢凍的一個(gè)重要原因。

一旦從生長(cháng)培養基轉移到冷凍培養基中，就要執行慢凍的過(guò)程。盡管冷凍細胞系是通常執行的程序，但是當沒(méi)有合適的冷凍器具時(shí)，或者由于存在血清，額外洗滌或操作不當時(shí)，就會(huì )出現問(wèn)題。當然，這個(gè)問(wèn)題是在細胞復蘇（快融）后才發(fā)現的。發(fā)現復蘇后的細胞大部分或者全部都是死細胞，甚至還有不容易發(fā)現的整個(gè)凍存過(guò)程的不當導致的細胞分化。所有這些問(wèn)題和擔憂(yōu)，都可以通過(guò)BambankerTM細胞冷凍培養基試劑家族來(lái)解決。 BambankerTM獨特的成分允許直接將細胞在-80°C或液氮中冷凍保存，從而避免了對額外設備的需求，并且也避免了耗時(shí)且復雜的梯度逐漸冷凍方案。

產(chǎn)品特色

• 可在-80°C或-196°C的溫度下長(cháng)期凍存細胞

• 冷凍保存ES細胞和iPS細胞的理想選擇

• 用人血清白蛋白制成-無(wú)其他動(dòng)物成分

• 細胞復蘇后的活率高

• 即用型冷凍介質(zhì)–無(wú)需程序或順序降溫冷凍

• 無(wú)血清–無(wú)污染風(fēng)險

• 保質(zhì)期長(cháng)

冷凍保存ES和iPS細胞的新希望（A new hope for the cryopreservation of ES and iPS cells）

靈長(cháng)類(lèi)胚胎干細胞（ES）和誘導多能干細胞（iPS）對冷凍保存極為敏感，與鼠類(lèi)或其他細胞相比，冷凍保存存在許多困難。 目前，玻璃化方法被認為適用于靈長(cháng)類(lèi)ES / iPS細胞，盡管使用DMSO的慢速冷凍方法已廣泛用于多種細胞系。 玻璃化是指將冷凍介質(zhì)快速冷卻至玻璃狀結晶狀態(tài)。 玻璃化方法需要無(wú)懈可擊的時(shí)機，高水平的技能，并且仍然會(huì )產(chǎn)生較差的結果。 另外，該方法顯示出對干冰運輸的敏感性。 為了解決這些問(wèn)題，Nippon Genetics已經(jīng)開(kāi)發(fā)了新的冷凍培養基BambankerTM HRM。

將人iPSC 201B7細胞冷凍保存在BambankerTM HRM中，常規玻璃化培養基或10％DMSO /培養基中。 3天后，根據Protocol將細胞解凍，然后鋪板。 含有10％DMSO的培養基只能回收小菌落，這表明存活率較低，而使用BambankerTM HRM可以回收幾乎與玻璃化冷凍保存液相同大小的大菌落。 這些結果表明，使用BambankerTM HRM可以達到與玻璃化保存解決方案相同的存儲效率，并且具有易于處理的額外優(yōu)勢。

人iPS細胞冷凍保存效率的比較。數據由美國公司日本東京研究中心Hasumi國際研究基金會(huì )提供。

比較了BambankerTMHRM和其他兩凍存工業(yè)（供應商T，供應商S）對于普通絨猴成纖維細胞的儲藏效率。 將成纖維細胞在6 cm培養皿中培養，直至融合度達到90-100％。 將細胞在-80℃冷凍兩個(gè)月。每種保存溶液在融化后分別在24和48 h拍攝顯微照片。 確定死細胞的百分比。 BambankerTM HRM的存活率最高，其次是供應商T的凍存液， 供應商S的凍存液有最低的存活率。 僅使用BambankerTM HRM儲存的細胞顯示出足夠的數量，因此可以直接用于iPS細胞誘導。

數據由京都大學(xué)靈長(cháng)類(lèi)研究所，分子生理學(xué)研究部提供

血清增加了長(cháng)期儲存的差異（Serum adds variation to long-term storage）

所有BambankerTM產(chǎn)品均不含血清。含有血清的冷凍保存培養基具有回收率波動(dòng)和成分不確定的缺點(diǎn)。凍存于含血清的培養基中的細胞的實(shí)驗可重復性可能會(huì )受到批次之間血清差異的影響，因為蛋白質(zhì)和其他生物分子的組成和濃度會(huì )隨每批血清而變化。解凍和使用這種含血清培養基的細胞時(shí)，可能會(huì )導致問(wèn)題。因為BambankerTM的每種成分都經(jīng)過(guò)精確定義，因此您可以放心，在不同時(shí)間存儲的細胞都將有一致的效率。

BambankerTM可防止不期望的分化（BambankerTM prevents undesired differentiation） 

不期望的細胞分化也可能是冷凍細胞長(cháng)期保存的一個(gè)問(wèn)題。 所有Bambanker試劑均旨在最大程度地減少此問(wèn)題。 對于特別麻煩的細胞，Bambanker不含DMSO的配方經(jīng)過(guò)特殊配制，可防止可能與含DMSO的冷凍保存試劑相關(guān)的問(wèn)題。 因此，請加入越來(lái)越多的實(shí)驗室的選擇，使用Bambanker保護其細胞系！

多能干細胞的細胞活力和ALP染色 

                    上排：解凍兩天后檢測到大量細胞。 解凍后細胞沒(méi)有形態(tài)變化 

                    下排：BambankerTM不會(huì )引起細胞分化，因為所有凍結的干細胞仍會(huì )產(chǎn)生高水平的堿性磷酸酶，這是多能干細胞的報告基因

細胞凍存液家族（Family of BambankerTM）