產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述 

    ?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 是一種可溶性的基底膜基質(zhì)膠，這種基質(zhì)是通過(guò)基因編輯技術(shù)將多種表達膠原蛋白的基因序列插入到經(jīng)永生化處理的小鼠細胞體系中，并在實(shí)體中抽提出來(lái)的。它的主要成分是層粘連蛋白，接著(zhù)是膠原蛋白IV、硫酸乙酰素蛋白多糖和巢蛋白?；啄せ|(zhì)也含有轉化生長(cháng)因子β、表皮生長(cháng)因子、類(lèi)胰島素生長(cháng)因子、成纖維細胞生長(cháng)因子和在中自然出現的其他生長(cháng)因子。

推薦應用

     本系列分為標準高濃度和低因子高濃度，其濃度和粘度均高于普通濃度的基質(zhì)膠，更適用于體內實(shí)驗(動(dòng)物模型)，如PDX、CDX、體外血管生成實(shí)驗。

產(chǎn)品參數

來(lái)源：小鼠

外觀(guān)：①顏色：含酚紅基質(zhì)膠表現為黃色-粉紅色，無(wú)酚紅基質(zhì)膠表現為半透明淡黃色； ②形態(tài)：標準型基質(zhì)膠4℃溶解后，呈透明流動(dòng)液態(tài)狀態(tài)；高濃度基質(zhì)膠0℃溶解后，呈透明流動(dòng)液態(tài)狀態(tài)，4℃久置呈半凝膠狀。

濃度多樣性： 蛋白濃度范圍在8~26mg/mL之間

內毒素： ≤ 4.5EU/ mL

凝膠時(shí)間：室溫條件下5-30min凝膠，溫度22°C至37°C時(shí)成膠速度加快

2D/3D應用非常廣泛：干細胞研究(分化、維持）、研究（侵襲）、 3D細胞培養（類(lèi)器官、3D細胞球）、體內植入（皮下、血管生成、栓塞）

產(chǎn)品質(zhì)量控制規范

• 通過(guò)小鼠抗體產(chǎn)物（MAP）檢測進(jìn)行常規小鼠菌落病原體篩選

• 提取自不含LDEV的小鼠細胞

• 對包括LDEV在內的多種病原體進(jìn)行廣泛的PCR檢測， 確保對生產(chǎn)過(guò)程中使用的原材料進(jìn)行嚴格控制

• 對細菌、真菌和支原體進(jìn)行檢測，確保陰性

• 使用BCA方法測定蛋白濃度

• 使用血清學(xué)方法檢測內毒素水平

• 在37℃下進(jìn)行14天的凝膠穩定性測試

• 每批次產(chǎn)品進(jìn)行生物學(xué)功能驗證（類(lèi)器官培養與分化實(shí)驗；皮下成瘤實(shí)驗；干細胞培養；血管生成實(shí)驗等）

• 對包括LDEV在內的多種病原體進(jìn)行廣泛的PCR檢測， 確保對生產(chǎn)過(guò)程中使用的原材料進(jìn)行嚴格控制

使用注意事項

實(shí)驗環(huán)境

 • 環(huán)境溫度：20–25℃ ；環(huán)境濕度：40–60%。

 • 請穿戴個(gè)人防護裝置，注意實(shí)驗室安全。

溫度控制  

• 基質(zhì)膠產(chǎn)品儲存在-20℃時(shí)是穩定的。通過(guò)分裝并一次性使用分裝物來(lái)盡可能減少產(chǎn)品的凍融次數。在-20℃冰箱中儲存分裝物直到準備使用。請不要儲存在無(wú)霜冰箱中。請務(wù)必保持產(chǎn)品的凍存狀態(tài)。

• 因為?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 在10℃以上會(huì )開(kāi)始凝膠化。所以需謹記：?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 和所有與?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 接觸的培養皿或培養基都應該預冷。在實(shí)驗的全部過(guò)程中請務(wù)必保持?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 處于冰上。

避免污染

• 實(shí)驗操作人員需嚴格區分實(shí)驗操作臺、清潔區和污染區，確保插取吸頭、加樣、丟棄吸頭的動(dòng)作呈單向流動(dòng)。

• 實(shí)驗后使用含 0.5% 次氯酸的消毒液對實(shí)驗操作區消毒。

其他

• 請將基質(zhì)膠產(chǎn)品小瓶淹沒(méi)在碎冰中，并放置在4℃冰箱里過(guò)夜解凍?；锘|(zhì)膠，蛋白濃度高時(shí)可能需要更多時(shí)間。請將?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 全程保持在冰上。無(wú)論是開(kāi)蓋取用產(chǎn)品或者對產(chǎn)品進(jìn)行分裝，請保持無(wú)菌操作。

• 操作過(guò)程中，需使用預冷的移液管輕柔地吹打混勻?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 以確保其均勻性。將?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 分裝到離心管中，每當?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 堵塞吸頭和/或移液管測量不精確時(shí)請更換吸頭。如果將產(chǎn)品放置在4℃的冰上 24-48個(gè)小時(shí)，凝膠化的?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠 可能會(huì )被重新水化。

操作說(shuō)明

分裝操作說(shuō)明

    基質(zhì)膠產(chǎn)品儲存在-20℃時(shí)是穩定的。通過(guò)分裝并一次性使用分裝物來(lái)盡可能減少產(chǎn)品的凍融次數。以下為實(shí)驗操作者進(jìn)行分裝操作說(shuō)明。

1.將基質(zhì)膠置于預冷盒或碎冰中，放入 4℃冰箱，過(guò)夜解凍。

2.將無(wú)菌離心管、無(wú)菌槍頭等接觸基質(zhì)膠的耗材放預冷盒中或冰箱中預冷，分裝前將融化好的基質(zhì)膠表面清潔后放入預冷盒或碎冰上。

3.在潔凈工作臺中，用1mL移液槍吸取250µL基質(zhì)膠到離心管里(或根據每次用量多少進(jìn)行分裝)，標注好信息，操作過(guò)程中盡量保持低溫，縮短操作時(shí)間。

4.分裝完成后放冰盒中，防止傾倒，并于冰箱保存。分裝后放置于-20℃冰箱中儲存備用。請不要儲存在自動(dòng)除霜的冰箱中儲存。使用前將基質(zhì)膠插入預冷盒或碎冰中，并放置于4°C冰箱中，在冰上過(guò)夜解凍，使基底膜基質(zhì)膠在穩定的低溫環(huán)境中緩慢充分融化。

使用方法說(shuō)明

包被涂層方法   

    ?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細胞，厚層凝膠法允許您在三維基質(zhì)內培養細胞，薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復雜的蛋白質(zhì)層，您可以在其上培養細胞。您的選擇基于您想要實(shí)現的最終結果，無(wú)論是細胞生長(cháng)、附著(zhù)還是分化。

一、薄層凝膠法

1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|(zhì)。使用預冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。

2.將培養板放置在冰上，以 50 µl/cm2 向生長(cháng)表面加入?；?基底膜基質(zhì)。

3.將培養板放置在 37 ℃，30 分鐘。

4.如果有必要的話(huà)，請在使用無(wú)血清培養基輕柔漂洗前吸出未結合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養板現在可以使用了。

二、薄層包被法

1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|(zhì)。使用預冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。

2.使用無(wú)血清培養基將?；锘啄せ|(zhì)稀釋到需要的濃度。對于您的實(shí)驗應用，您應該完成以經(jīng)驗為主的研究來(lái)確定您的最適包被濃度。

3.向被包被的容器中加入稀釋的?；?基底膜基質(zhì)。加入的量應該足以容易地覆蓋整個(gè)生長(cháng)表面。在室溫下培養 1 個(gè)小時(shí)。

4.吸出未結合的材料并使用無(wú)血清培養基輕柔地漂洗。培養板現在可以使用了。

三、厚層凝膠法

1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|(zhì)。使用預冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。

2.將培養板放置在冰上。向?；锘啄せ|(zhì)中加入細胞并使用預冷的移液管懸浮。以150-200µl/cm2 向生長(cháng)表面加入?；?基底膜基質(zhì)。

3.將培養板放置在37℃，30分鐘?，F在可以添加培養基了。細胞也可以培養在這一凝膠的頂部。

細胞復蘇：

   使用細胞復蘇溶液在冰上 7 小時(shí)內解聚?；锘啄せ|(zhì)能夠實(shí)現將生長(cháng)在?；锘啄せ|(zhì)上的細胞最有效地復蘇，或者使用中性蛋白酶，考慮到連續培養，中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細胞。

應用操作說(shuō)明

   以下以小鼠皮下成瘤實(shí)驗為例來(lái)進(jìn)行?；锔邼舛冉鹋频蜕L(cháng)因子基質(zhì)膠的應用實(shí)驗操作說(shuō)明。

一、實(shí)驗目的

1、熟練掌握小鼠皮下成瘤技術(shù)

2、了解掌握多種細胞株皮下成瘤技術(shù)

3、觀(guān)察小鼠皮下接種細胞體內成瘤形態(tài)的變化

二、實(shí)驗原理

    皮下成瘤實(shí)驗（包括了PDX，CDX和Syngeneic）是將細胞或組織通過(guò)原位或皮下移/植到小鼠體內使其成瘤，在免疫學(xué)、藥品與生物制品的安全性評價(jià)及有效藥品的篩選等實(shí)驗方面，有著(zhù)很高的研究?jì)r(jià)值。相對于單純的細胞種植，混合基質(zhì)膠后可顯著(zhù)提高，縮短成瘤時(shí)間，其主要原因是基質(zhì)膠為細胞在接受宿主營(yíng)養之前提供充足營(yíng)養環(huán)境，起到橋梁的作用。實(shí)驗一般選擇4-8周齡的小鼠，雌雄均可，接種部位選擇皮下。一般一只小鼠接種細胞數量為1~5×106個(gè)細胞，倫理學(xué)要求不能超過(guò)1×107細胞/只，接種后2-3周出現肉眼較明顯的瘤塊（具體根據細胞、增殖速度、細胞接種量、小鼠品系等因素有所不同）。

三、實(shí)驗儀器、材料

1、儀器：生物安全柜、細胞培養箱、低溫水平式離心機、倒置顯微鏡

2、材料：無(wú)菌槍頭；10 cm細胞培養皿；無(wú)菌EP管；一次性注射器等耗材，可根據實(shí)驗設計自行調整

3、試劑：基質(zhì)膠、基礎培養基、含10%胎牛血清培養基、1×PBS、胰酶細胞消化液

四、實(shí)驗內容與方法

4.1實(shí)驗準備：

將基質(zhì)膠置于特制的冰盒內，于4℃冰箱中過(guò)夜緩慢融化；

4.2 細胞準備：

4.2.1選取狀態(tài)良好的、對數生長(cháng)的細胞，棄上清，加入2 mL 1×PBS溶液輕輕晃動(dòng)清洗，棄掉液體。

4.2.2加入1 mL 0.25%胰酶細胞消化液到培養皿中，靜置10秒后，棄掉胰酶，用殘留的胰酶繼續室溫消化1~3分鐘。

4.2.3待細胞變圓時(shí)（切記不可消化到細胞邊緣透亮），加入1 mL含10%胎牛血清的培養基終止消化。小心將細胞吹散，制成細胞懸液收集至15 mL塑料離心管中。

4.2.4 1000 rpm離心3分鐘，棄上清。PBS清洗細胞1次后，加入無(wú)血清基礎培養基重懸細胞，取10 μL細胞懸液進(jìn)行細胞計數。

4.2.5

Ø HepG2細胞：每只小鼠接種500萬(wàn)個(gè)細胞。根據細胞密度取所需細胞懸液至無(wú)菌1.5 mL塑料離心管中，1000 rpm離心3分鐘，棄上清，補充無(wú)血清培養基或PBS至總體積為300 μL。對于空白對照組，因不需要與基質(zhì)膠混合，只需終濃度制備成5×107 個(gè)細胞/mL即可，取600μL備用。

Ø HCT-116細胞：每只小鼠接種100萬(wàn)個(gè)細胞。根據細胞密度取所需細胞懸液至無(wú)菌1.5 mL塑料離心管中，1000 rpm離心3分鐘，棄上清，補充無(wú)血清培養基或PBS至總體積為300 μL。對于空白對照組，因不需要與基質(zhì)膠混合，只需終濃度制備成1×107 個(gè)細胞/mL即可，取600μL備用。

Ø MIA-PaC-2細胞：每只小鼠接種1000萬(wàn)個(gè)細胞。根據細胞密度取所需細胞懸液至無(wú)菌1.5 mL塑料離心管中，1000 rpm離心3分鐘，棄上清，補充無(wú)血清培養基或PBS至總體積為500μL。對于空白對照組，因不需要與基質(zhì)膠混合，只需終濃度制備成5×107 個(gè)細胞/mL即可，取1000μL備用。

2.4 基質(zhì)膠混合：將細胞懸液和基質(zhì)膠在4℃環(huán)境下按1:1比例混勻?？瞻讓φ战M可直接進(jìn)行皮下/注射。

2.5皮下/注射：左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右側背部皮下/注射，接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1 cm深，以減少注射后細胞懸液從針眼溢出，接種體積為100 μL。MIA-PaC-2細胞需注射200 μL/只。

2.6記錄數據：將裸鼠放回籠內繼續飼養，根據實(shí)驗需要定期測量瘤體體積，記錄數據做出曲線(xiàn)，并在體積不超過(guò)2000 mm3前對裸鼠進(jìn)行Euthanasia，取出，拍照。