Di家族細胞膜熒光染料選擇區分DiD，DiO，DiI，DiR

DiI, DiO, DiD和DiR作為類(lèi)長(cháng)鏈的親脂性二烷基碳菁類(lèi)染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標記細胞膜以及其他脂溶性生物結構。作為類(lèi)環(huán)境敏感型熒光染料，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強度很弱）結合時(shí)，其熒光強度顯著(zhù)增強。旦進(jìn)入細胞后，它們在細胞內質(zhì)膜中逐步擴散，于恰當濃度條件下可將整個(gè)細胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數，偏光依賴(lài)性和很短的激發(fā)壽命。

四種細胞膜染料的區別：

      DiD染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，這類(lèi)染料有很高的淬滅常數和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，染料在整個(gè)細胞膜上擴散，最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細胞膜染色。

      綠色熒光、親脂性羰花青DiOC18(3)被廣泛用作親脂示蹤劑。它在水里是弱熒光的，但當嵌入膜時(shí)，它的熒光和光穩定性都很好。

      DiI是一種親脂性膜染料，進(jìn)入細胞膜后可以側向擴散逐漸使整個(gè)細胞的細胞膜被染色。DiI在進(jìn)入細胞膜之前熒光非常弱，僅當進(jìn)入到細胞膜后才可以被激發(fā)出很強的熒光。DiI被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細胞或組織的示蹤劑或長(cháng)期示蹤劑，通常不會(huì )影響細胞的生存力。

      DIR是一個(gè)親脂性、近紅外熒光花青染料。這個(gè)染料常用于標記細胞質(zhì)膜。兩個(gè)18-碳鏈插入到細胞膜，從而特定的、穩定的細胞染色，幾乎不會(huì )發(fā)生細胞間的染料轉移?？梢杂靡掖寂渲闷鋬Υ嬉?。細胞染色通常使用的濃度時(shí)1-10uM，孵育10-20分鐘的。

      它們的熒光顏色區分明顯：DiI(橙色熒光)，DiO(綠色熒光)，DiD(紅色熒光)和 DiR (深紅色熒光)這使得他們可以用來(lái)對活細胞進(jìn)行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著(zhù)比DiI更長(cháng)的激發(fā)波長(cháng)和發(fā)射波長(cháng)，在細胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在活體成像中用來(lái)示蹤。

四種細胞膜染料的優(yōu)點(diǎn)：

1. 應用廣泛：主要作用是標記細胞膜，用于活的或固定的神經(jīng)元等細胞或組織的長(cháng)期示蹤劑，同時(shí)還可以標記其他疏水結構，例如外泌體

2. 不會(huì )影響細胞的生存力

3. 體外培養的條件下可以存活很長(cháng)時(shí)間

4. 在經(jīng)過(guò)固定的神經(jīng)元細胞膜上的遷移速率為 0.2-0.6mm/day

5. 在活的神經(jīng)元細胞膜上的的遷移速率為 6mm/day

Di家族熒光染料選擇小竅門(mén)：

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活細胞或固定細胞及組織（請您根據您的需求選擇相應的探針），DiI比DiO熒光更亮；DiD，DiR（D12731）波長(cháng)更長(cháng)，更適合組織染色，DiA為親脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），常用于神經(jīng)元的示蹤，可與DiI聯(lián)合使用進(jìn)行神經(jīng)細胞的雙色標記。研究發(fā)現，某些情況下當DiO不能標記固定組織時(shí)，DiA可得到良好標記效果。DiA與磷脂雙層膜結合后，光譜遷移明顯加強。正由其發(fā)射光譜非常廣，在適當的濾光片下，可以綠色、橙色，甚至紅色熒光被檢測到。沃博生物提供物美價(jià)廉的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

關(guān)于染料的使用注意事項

1.DiI 可以溶解于無(wú)水乙醇、DMSO 和 DMF，溶解度約為 1-2.5mg/ml，發(fā)現較難溶解時(shí)可以適當用超聲處理以促進(jìn)溶解。

2.用于細胞膜熒光標記時(shí)，DiI 的常用濃度為 1-25μM，最常用的濃度為 5-10 μM。

3. DiI 可以直接染色活的細胞或組織，染色時(shí)間通常為 5-20 分鐘。

4. 染固定的細胞時(shí)，通常使用 4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當的固定液會(huì )導致熒光背景較高。

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