當前位置： 首頁(yè) - 新聞中心 - 專(zhuān)業(yè)知識
簡(jiǎn)單免洗檢測，可同時(shí)監測3種耐藥性相關(guān)的ABC轉運蛋白耐藥性是一種因ATP結合盒式（ATP Binding Cassette，ABC）膜轉運蛋白家族上調介導所產(chǎn)生的現象。ABC轉運蛋白的過(guò)度表達了加速有毒物質(zhì)從細胞中的去除，例如化療劑從腫瘤細胞中排出，或抗生素從耐藥菌株中排出。Enzo的EFLUXX-ID? 多藥耐藥性檢測試劑盒可實(shí)現同時(shí)對三種臨床相關(guān)的 ABC 轉運蛋白的功能檢測：包括MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2 和 BCRP。
◆特點(diǎn)
● 簡(jiǎn)單免洗的操作步驟，結果可在1小時(shí)內獲得
● 可檢測與3種ABC轉運蛋白（MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP）活性相關(guān)的耐藥性
● 通過(guò)單一專(zhuān)用染料可定量檢測活細胞中的多藥耐藥性（MDR）活性，并以MDR 活性因子（MAF）表征
● 試劑盒內含有三種已知的MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP蛋白特異性抑制劑
● 可檢測Calcein AM染料無(wú)法檢測的BCRP蛋白活性
● 有綠色、金色兩種熒光染料可供選擇
● 兩種染料均可與表達GFP的細胞系或其他CELLESTIAL? 染料同時(shí)使用
◆作用機制
EFLUXX-ID?使用了一種疏水性非熒光化合物，這種化合物容易穿透細胞膜，經(jīng)細胞內酯酶水解成親水性熒光染料。除非EFLUXX-ID? 染料被泵出至細胞外，否則酯酶裂解的染料會(huì )一直存在于細胞內。因此，表現出耐藥性的細胞將染料主動(dòng)運輸泵出胞外，會(huì )出現熒光減弱的現象。EFLUXX-ID? 檢測是目前少有可同時(shí)監測三種主要的ABC轉運蛋白并能夠分析單泵活性的試劑盒。
|
熒光團 |
兼容的EFLUXX-ID? 試劑 |
|
Cy 3 & Cy 5的偶聯(lián)物、Pl、7-AAD、APC、Texas Red、RFP、YFP、TAMRA、UV和Violet 染料 |
EFLUXX-ID? 綠色熒光染料 |
|
GFP/eGFP、RFP、PI、7-AAD、APC、Cy 5的偶聯(lián)物、Rhodamine 123、Texas Red、UV和Violet 染料 |
EFLUXX-ID? 金色熒光染料 |
表1：EFLUXX-ID? 多藥耐藥性染料與其他熒光染料的兼容性
圖1：對三種主要ABC轉運蛋白的活性進(jìn)行檢測。使用EFLUXX -ID Green（上）、Gold（中）或Calcein AM（下）染料，通過(guò)流式細胞術(shù)評估CHO K1細胞中ABC轉運蛋白的活性。與未處理的細胞相比，用ABC轉運蛋白特異性抑制劑（圖中陰影部分）處理可誘導染料保留在細胞內（圖中實(shí)線(xiàn)部分）。平均熒光強度（MFI）的差異表明了對應蛋白的活性，在圖中通過(guò)多藥耐藥性活性因子值（MAF）進(jìn)行表征。更高的MAF值表明EFLUXX-ID染料對抑制劑有著(zhù)良好的特異性。而Calcein AM染料的低MAF值表明其（常用的MDR檢測探針）無(wú)法檢測BCRP活性。
圖2：使用EFLUXX-ID? Green和EFLUXX-ID? Gold染料在CHO K1細胞中評估已知抑制劑對ABC轉運蛋白活性的結果分析。將細胞與試劑盒中含有的MDR普通抑制劑（左一）、轉運蛋白特異性抑制劑在37°C下孵育5 min。隨后在37°C下用指定的染料染色細胞30 min，并立即利用流式細胞術(shù)進(jìn)行分析。所用抑制劑：5 μM環(huán)胞霉素 A（MDR普通抑制劑）、20 μM維拉帕米（P-gp特異性抑制劑）、0.05 mM MK-571（MRP特異性抑制劑）、0.05 mM新生霉素（BCRP特異性抑制劑）。
圖3：EFLUXX-ID? Green 490/514 nm ex/em和Gold 530/570 nm ex/em 試劑的光譜特性可與其他常見(jiàn)的熒光染料進(jìn)行多重檢測。
產(chǎn)品詳情
|
應用 |
流式細胞術(shù)，熒光顯微鏡 |
|
應用說(shuō)明 |
EFLUXX-ID? 多藥耐藥性檢測試劑盒可對活細胞（懸浮細胞和貼壁細胞）中的耐藥表型進(jìn)行檢測和分析。 |
|
品質(zhì)保證 |
每批次EFLUXX-ID? Gold耐藥檢測試劑盒的樣品試劑盒均已按照操作手冊中的步驟，對第5代和第20代間的 CHO K1細胞系進(jìn)行染色。獲得的結果如下： 1. 維拉帕米介導的抑制后MAF>80 2. MK-571介導的抑制后MAF>60 3. 新生霉素介導的抑制后MAF>40 |
|
包裝 |
100 assays（流式細胞術(shù)） |
|
使用/穩定性 |
自交貨后，試劑盒組分在適當的儲存條件下可穩定保存一年。 |
|
儲存條件 |
避光。避免反復凍融。 |
|
運輸條件 |
藍冰運輸 |
|
短期儲存 |
-20°C |
|
長(cháng)期儲存 |
-80°C |
|
組分 |
2 瓶，EFLUXX-ID? Gold或EFLUXX-ID? Green檢測試劑 300 nmoles，MDR1 抑制劑（維拉帕米） 750 nmoles，MRP 抑制劑（MK-571） 1.5 μmoles，BCRP 抑制劑（新生霉素） 500 μL，碘化丙啶 |
|
科學(xué)背景 |
耐藥性是一種由跨膜ATP結合盒（ATP Binding Cassette ，簡(jiǎn)稱(chēng)ABC）轉運蛋白家族上調介導的現象。 ABC轉運蛋白的過(guò)表達加速了毒性劑從細胞中去除，例如化療劑從腫瘤細胞中流出，或抗生素從耐藥菌株中流出。 |
|
監管狀態(tài) |
RUO - 僅供研究用 |
相關(guān)產(chǎn)品
|
貨號 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規格 |
|
ENZ-51029-K100 |
EFLUXX-ID? Green multidrug resistance assay kit藥檢測試劑盒（綠色熒光） |
1 Kit |
|
ENZ-51030-K100 |
EFLUXX-ID? Gold multidrug resistance assay kit EFLUXX-ID? 耐藥檢測試劑盒（金色熒光） |
1 Kit |
- 上一頁(yè)： 如何制備原生質(zhì)體
- 下一頁(yè)： Wako氧化應激檢測試劑盒專(zhuān)題