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TSA/PSA是一種成熟的細胞信號放大技術(shù)，當TSA/PSA與我們光穩定性、水溶性的結合后，產(chǎn)生的熒光信號具有比傳統免疫組織化學(xué)、免疫細胞化學(xué)和免疫熒光方法產(chǎn)生的信號更高的度和靈敏度。是美國AAT Bioquest自主研發(fā)的與功能類(lèi)似的信號放大方法，其熒光信號強度比廣泛使用的tyramide（TSA）試劑高10-50倍。感興趣的朋友一起來(lái)看看吧！
TSA/PSA原理
酪胺信號放大（TSA）是一種基于辣根過(guò)氧化酶（HRP）的催化活性對靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標記的酶學(xué)檢測方法。原理為酪胺Tyramide的過(guò)氧化物酶反應（已標記熒光的酪胺在HRP催化H2O2下形成共價(jià)鍵結合位點(diǎn)）產(chǎn)生的大量酶促產(chǎn)物與目標蛋白的酪氨酸殘基共價(jià)結合，從而使目標蛋白標記上特異的熒光或生物素。
圖1.TSA/PSA原理及工作流程圖。通過(guò)類(lèi)似于傳統ICC和IHC方法的工作流程，TSA/PSA試劑可以通過(guò)幾個(gè)簡(jiǎn)單的步驟實(shí)現對所需目標的靈敏檢測。
表1.TSA/PSA技術(shù)與傳統免疫熒光對比
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TSA/PSA多標免疫熒光 |
傳統免疫熒光 |
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靶點(diǎn)數目 |
不受限制（多可同時(shí)染色7-10種） |
一般標記3種（含DAPI）,>3種標記難度較大 |
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一抗種類(lèi) |
同一種屬的不同抗體即可滿(mǎn)足要求 |
不同種屬的不同抗體 |
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二抗種類(lèi) |
連接辣根過(guò)氧化物酶的同種屬二抗 |
連接熒光探針的不同種屬二抗 |
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染色策略 |
任何樣本無(wú)需任何染色策略，簡(jiǎn)單的重復前一步的染色過(guò)程，樣本/靶點(diǎn)的差異不影響染色過(guò)程，使用簡(jiǎn)單方便 |
樣本抗原的空間位置的差異，需要設計復雜的染色策略。樣本/靶點(diǎn)的差異導致染色策略的差異，染色過(guò)程復雜、多變 |
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染色效果 |
高染色分辨率和染色特異性，信號強度更強,更穩定,淬滅時(shí)間更長(cháng)，無(wú)背景影響，各靶點(diǎn)的信噪比大大提高，尤其適合組織基于單細胞的定量分析 |
亮度較弱,容易淬滅,各種抗體間存在互相影響，背景較高，對基于單細胞的定量分析不利。 |
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實(shí)驗成本 |
同一種屬的一抗和二抗，價(jià)格相對便宜。 簡(jiǎn)單的染色策略和無(wú)需任何重復的預實(shí)驗，即可掌握整個(gè)染色技術(shù)，大大縮小了預實(shí)驗的材料損耗。 一抗和二抗工作濃度更低,單次費用更低 |
不同種屬的抗體價(jià)格存在差異，一般種屬的價(jià)格高。 不同種屬的二抗，價(jià)格存在差異，一般的種屬價(jià)格高。 尋找合適的染色策略，復雜的多次重復的預實(shí)驗大大的增加了實(shí)驗成本 |
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應用范圍 |
二抗具備通用性，因此實(shí)驗室中所有的研究領(lǐng)域均可使用 |
二抗不具備通用性，實(shí)驗室中應用領(lǐng)域受到局限 |
TSA/PSA特點(diǎn)
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TSA |
PSA |
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1.適用廣，多色標記 2.多重標記可避免抗體種屬交叉問(wèn)題 3.染色特異性好，信號強度高，適合低豐度靶標 4.石蠟切片樣本熒光染色背景干凈 |
1.檢測靈敏度提高了100多倍，比標準IHC，ICC，IF方法高出100倍 2.改進(jìn)的熒光信號比酪胺（TSA）試劑高10至50倍 3.PSA 自由基的更高反應性允許在HRP-靶相互作用位點(diǎn)更快速，有效和更穩定記Styramide綴合物。 4.在不犧牲靈敏度的情況下，PSA可以使用更少量的抗體/探針 |
圖2.分別用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽(yáng)性組織的染色結果圖。人肺腺癌陽(yáng)性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用polyHRP標記的山羊抗兔IgG二抗孵育，后使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分別染色。圖像顯示iFluor 488 PSA與Alexa Fluor 488 TSA相比提高了熒光IHC的靈敏度。
圖3.分別用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽(yáng)性組織的染色結果圖。人肺腺癌陽(yáng)性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用HRP標記的山羊抗兔IgG二抗孵育。顯影：iFluor 488 酪胺（左）；Alexa Fluor 488 酪胺（右）。核染色：DAPI
圖4.Styramide 超級信號放大試劑盒的信號強度對比。 （A）將HeLa細胞固定，透化并用各種濃度的兔抗微管蛋白一抗標記，建議的稀釋濃度為：1：500。 然后將細胞直接與AlexaFluor488綴合的山羊抗兔IgG二抗染色，后分別與HRP標記的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide（#45205）染色。 使用FITC濾光片組拍攝熒光圖像，并以相同的曝光時(shí)間進(jìn)行分析。 （B）測量相對熒光信號強度，并比較不同檢測方法之間的強度。
相關(guān)產(chǎn)品推薦
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分類(lèi) |
貨號 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
Ex(nm) |
Em(nm) |
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TSA試劑 |
45100 |
iFluor 488 酪胺 |
491 |
514 |
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45105 |
iFluor 555 酪胺 |
552 |
567 |
|
|
45110 |
iFluor 647 酪胺 |
649 |
665 |
|
|
11070 |
AF488 酪胺 |
491 |
518 |
|
|
11075 |
AF546 酪胺 |
554 |
570 |
|
|
11082 |
AF594 酪胺 |
590 |
617 |
|
|
11065 |
Cy3 酪胺 |
555 |
565 |
|
|
11066 |
Cy5 酪胺 |
644 |
665 |
|
|
11061 |
Azido-Cy5酪胺 |
644 |
665 |
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PSA試劑 |
45000 |
iFluor 350 Styramide |
345 |
442 |
|
45020 |
iFluor 488 Styramide |
491 |
514 |
|
|
45025 |
iFluor 546 Styramide |
541 |
557 |
|
|
45027 |
iFluor 555 Styramide |
552 |
567 |
|
|
45030 |
iFluor 568 Styramide |
568 |
587 |
|
|
45035 |
iFluor 594 Styramide |
592 |
619 |
|
|
45045 |
iFluor 647 Styramide |
649 |
665 |
|
|
45050 |
iFluor 680 Styramide |
676 |
695 |
|
|
45055 |
iFluor 700 Styramide |
685 |
710 |
|
|
45065 |
iFluor 750 Styramide |
749 |
775 |
|
|
45070 |
iFluor 790 Styramide |
782 |
811 |
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試劑盒 |
45200 |
iFluor 350 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
345 |
442 |
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45205 |
iFluor 488 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
491 |
514 |
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|
45220 |
iFluor 555 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
552 |
567 |
|
|
45230 |
iFluor 594 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
592 |
619 |
|
|
45240 |
iFluor 647 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG |
649 |
665 |