• <tt id="2eeee"></tt>

    歡迎蒞臨南京沃博生物科技有限公司官方網(wǎng)站!

    體外受精(IVF)過(guò)程中常用的培養基介紹

    體外受精(In Vitro Fertilization)是指哺乳動(dòng)物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完成受精過(guò)程的技術(shù),英文簡(jiǎn)稱(chēng)為IVF。由于它與胚胎移植技術(shù)(ET)密不可分,又簡(jiǎn)稱(chēng)為IVF-ET。在生物學(xué)中,把體外受精胚胎移植到母體后獲得的動(dòng)物稱(chēng)試管動(dòng)物(test-tube animal)。這項技術(shù)成功于20世紀50年代,在最近20年發(fā)展迅速,現已日趨成熟而成為一項重要而常規的動(dòng)物繁殖生物技術(shù)。

    體外受精技術(shù)對動(dòng)物生殖機理研究、畜牧生產(chǎn)、醫學(xué)和瀕危動(dòng)物保護等具有重要意義。如用小鼠、大鼠或家兔等作實(shí)驗材料,體外受精技術(shù)可用于研究哺乳動(dòng)物配子發(fā)生、受精和胚胎早期發(fā)育機理。在家畜品種改良中,體外受精技術(shù)為胚胎生產(chǎn)提供了廉價(jià)而高效的手段,對充分利用優(yōu)良品種資源,縮短家畜繁殖周期,加快品種改良速度等有重要價(jià)值。在人類(lèi),IVF-ET技術(shù)是治療某些不孕癥和克服性連鎖病的重要措施之一。體外受精技術(shù)還是哺乳動(dòng)物胚胎移植、克隆、轉基因和性別控制等現代生物技術(shù)不可缺少的組成部分。

    體外受精過(guò)程需要從體內取出成熟的卵母細胞和精子,在離體條件下培養一段時(shí)間,然后進(jìn)行人工授精,受精卵需要在體外培養發(fā)育成胚胎才能進(jìn)行后續的應用(例如胚胎移植等),這些過(guò)程中由于脫離了母體的條件,需要用到各類(lèi)的培養液模擬體內的生理環(huán)境,今天就來(lái)給大家介紹一下體外受精過(guò)程中常用的一些培養基:

    卵母細胞的培養:

    卵母細胞體外成熟是一個(gè)復雜的過(guò)程,細胞質(zhì)和細胞核需要發(fā)生一系列聯(lián)系性的結構和分子方面的變化,才能完成胞核和胞質(zhì)的成熟。大量研究證明哺乳動(dòng)物卵母細胞體外成熟所采用的培養液不僅對卵母細胞的成熟,而且對受精和隨后的胚胎發(fā)育均有著(zhù)顯著(zhù)的影響。目前對牛卵母細胞體外成熟的研究主要集中在以TCM199為基礎培養液,再添加激素,血清,卵泡液, 生長(cháng)因子及顆粒細胞等成分來(lái)模擬卵母細胞體內成熟的環(huán)境以及各種成分間的相互作用以期達到與體內相當的成熟效果。

    常用的卵母細胞成熟培養液配方:

    基礎培養液為TCM-199,添加10%FCS,25mM Hepes、0.55mg/ml丙酮酸鈉及100IU青、鏈霉素;

    精子的獲能及卵子受精:

    精子獲能:哺乳動(dòng)物精子的獲能方法有培養和化學(xué)誘導兩種方法。牛、羊的精子常用化學(xué)藥物誘導獲能,誘導獲能的藥物常用肝素和鈣離子載體。受精:即獲能精子與成熟卵子的共培養,除鈣離子載體誘導獲能外,精子和卵子一般在獲能液中完成受精過(guò)程。受精培養時(shí)間與獲能方法有關(guān)。在B2液中一般為6-8小時(shí)而用TALP液作受精液時(shí)可培養18~24h。精子和卵子常在小滴中共培養,受精時(shí)精子密度為1~9×106/ml,每10微升精液中放人1~2枚卵子,小滴體積一般為50~200微升。

    精子細胞培養液配方推薦:

    精子洗滌液:BO/TALP基礎液+6mg/ml BSA(FractⅤ)+5mM咖啡因

    精子獲能液:BO/TALP基礎液+6mg/ml BSA(FractⅤ)+5mM咖啡因+60ug/ml肝素

    胚胎體外培養:

    胚胎培養液分為復雜的和化學(xué)成分明確的培養液兩大類(lèi)。復雜培養液中的成分很多,除無(wú)機和有機鹽外,還添加維生素、氨基酸、核苷酸和嘌呤等營(yíng)養成分和血清。常用的胚胎培養基有M199、KSOMF10,用它們培養胚胎時(shí),可以采用體細胞共培養體系,即體細胞與胚胎在微滴中共同培養,利用體細胞生長(cháng)過(guò)程中分泌的有益因子,促進(jìn)胚胎發(fā)育,克服發(fā)育阻斷。

    常見(jiàn)胚胎體外培養液配方推薦:

    M199+10%FCS+2.2mg/100ml丙酮酸鈉+100IU/ml雙抗

    mSOF+10%FCS+2.2mg/100ml丙酮酸鈉+100IU/ml雙抗

    產(chǎn)品推薦:

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    貨號

    規格

    HEPES-TALP培養液

    IVL01

    500ml、6*500ml

    IVF-TALP培養液(TALP基礎培養液)

    IVL02

    100ml、6*100ml

    sperm-TALP培養液

    IVL03

    100ml、6*100ml

    KSOM+AA培養基

    IVL04

    100ml、6*100ml

    SOF(合成輸卵管液)培養基

    IVL05

    100ml、6*100ml

    KSOM+AA(無(wú)蛋氨酸)

    IVL08

    100ml、6*100ml

    M199

    MDP02、MDP04

    10LT,50LT,10*1LT

    上述培養基成分表:

    組分
    (單位:mg/L

    IVL01

    IVL02

    IVL03

    IVL04

    IVL05

    IVL08

    Glycine(甘氨酸)

     

     

     

    3.75

     

    3.75

    L-Alanine(丙氨酸)

     

     

     

    4.45

     

    4.45

    L-Arginine,Hydrochloride
    (精氨酸)

     

     

     

    63.20

     

    63.20

    L-Asparagine,Monohydrate
    (天冬酰胺)

     

     

     

    7.50

     

    7.50

    L-AsparticAcid(天冬氨酸)

     

     

     

    6.66

     

    6.66

    L-Cystine(胱氨酸)

     

     

     

    12.02

     

    12.02

    L-Glutamine(谷氨酰胺)

     

     

     

    146.15

    29.23

    146.15

    L-Histidine,Anhydrous(組氨酸)

     

     

     

    20.96

     

    20.96

    L-Isoleucine(異亮氨酸)

     

     

     

    26.23

     

    26.23

    L-Leucine(亮氨酸)

     

     

     

    26.24

     

    26.24

    L-Lysine,Hydrochloride(賴(lài)氨酸)

     

     

     

    36.52

     

    36.52

    L-Methionine(甲硫氨酸)

     

     

     

    7.46

     

     

    L-Phenylalanine(苯丙氨酸)

     

     

     

    16.52

     

    16.52

    L-Proline(脯氨酸)

     

     

     

    5.76

     

    5.76

    L-Serine(絲氨酸)

     

     

     

    5.26

     

    5.26

    L-Tryptophan(色氨酸)

     

     

     

    5.11

     

    5.11

    L-Tyrosine(酪氨酸)

     

     

     

    18.12

     

    18.12

    L-Valine(纈氨酸)

     

     

     

    23.42

     

    23.42

    CalciumChloride,Anhydrous
    (氯化鈣、無(wú)水)

    220.2

    222.2

     

     

     

     

    CalciumChloride,Dihydrate
    (氯化鈣、二水合物)

     

     

    310

    250.0

    261.68

    250

    EDTA,DisodiumSalt,Dihydrate
    EDTA二鈉二水合物)

     

     

     

    3.72

     

    3.72

    MagnesiumChloride,Hexahydrate
    (六水合氯化鎂)

    83.9

    101.65

    81.32

     

     

     

    MagnesiumSulfate,Heptahydrate
    (七水硫酸鎂)

     

     

     

    49.3

    372.18

    49.3

    PotassiumChloride
    (氯化鉀)

    238.72

    238.4

    230.95

    186.38

    533.78

    186.38

    PotassiumPhosphate,
    Monobasic,Anhydrous
    (磷酸二氫鉀)

     

     

     

    47.99

    161.95

    47.99

    SodiumBicarbonate(碳酸氫鈉)

    168

    2100

    2100

    2100.25

    2100.25

    2100.25

    SodiumChloride(氯化鈉)

    6669

    6669

    5850

    5551.79

    6293.99

    5551.8

    SodiumPhosphate,Monobasic,
    Monohydrate(磷酸二氫鈉)

    48

    55.2

    40.02

     

     

     

    BovineSerumAlbumin,FractionV
    BSA

     

     

     

    1000

     

    1000

    CitricAcid,Trisodium
    (TrisodiumCitrate),Dihydrate(檸檬酸)

     

     

     

     

    99.99

     

    D-Glucose,Anhydrous
    (葡萄糖)

     

     

     

    36.03

     

    36.03

    HEPES

    2384

     

    2383

     

     

     

    PhenolRed,SodiumSalt
    (酚紅)

     

     

     

     

    10.0

     

    PyruvicAcid,SodiumSalt
    (丙酮酸鈉)

     

     

     

    22

    44.02

    22.0

    SodiumL-Lactatesolution(60%)
    L-乳酸鈉)

    1.416

    1.416

    3.6800

    1.416

    0.757

    1.416

    Myo-Inositol(肌醇)

     

     

     

     

    499.04

     

    免费无遮挡无码永久视频-欧洲中文日韩亚洲精品视频-国产在线观看无码免费视频-永久免费无码网站在线观看-国产精品国语对白露脸在线播放