產(chǎn)品信息

本產(chǎn)品采用層析式雙抗體夾心法檢測Cas12和Cas13酶切割產(chǎn)物。當靶基因經(jīng)過(guò)LAMP，RAA/RPA，PCR擴增后，使用Cas12和Cas13酶同時(shí)對擴增產(chǎn)物進(jìn)行切割，Cas12酶對應的DNA信號探針A（Cas12切割），與Cas13酶對應的RNA信號探針B（Cas13切割）進(jìn)行如下修飾，即可使用本產(chǎn)品進(jìn)行切割產(chǎn)物的檢測：

1）? 探針A一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM），探針B一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有地高辛（Dig）；

2）? 或，探針A一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有地高辛（Dig），探針B一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）。

預期用途:

Cas12和Cas13雙酶切后的產(chǎn)物檢測。

包裝規格/貨號:

包裝規格：50條/桶，鋁箔袋防潮包裝。

圖1. 單靶標HybriDetect側向層析試紙條（彩虹型）結構示意圖

儲存條件及有效期:

儲存條件：存放于避光干燥處，儲存溫度4~30℃。

有效期：12個(gè)月。

操作步驟:

1.?根據檢測樣品數量取出相應數量的試紙條，并在吸收墊（圖1）上做好標記。每根試紙條只能用于單次，DNA探針和RNA探針同時(shí)切割的產(chǎn)物檢測。酶切產(chǎn)物體積為50~100μL時(shí)，可直接在200μL PCR反應管中檢測核酸產(chǎn)物，產(chǎn)物體積不足50μL時(shí)，需在PCR管內加超純水補足體積至50μL，吸打混勻后，才能進(jìn)行檢測。

2.?LAMP，RAA/RPA，PCR擴增產(chǎn)物加入CRISPR體系酶切反應結束后，打開(kāi)PCR反應管，將試紙條結合墊端（箭頭端）插入PCR反應管（圖1），液面不得超過(guò)結合墊最上端，待判讀區全部浸潤（約需1～2min，外界環(huán)境溫度較低時(shí)，如冬季，會(huì )降低吸水速度，判讀區浸潤時(shí)間將會(huì )延長(cháng)），待檢測線(xiàn)（T線(xiàn)）顯色后，可以將試紙條拿出。根據試紙條顯色情況直接讀取檢測結果。

3.??質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）顯色后10min內觀(guān)察結果，10min后判讀無(wú)效。

4.????記錄檢測結果，將試紙條密封丟棄在安全處。

結果判讀:

?

圖2. CRISPR雙酶切檢測試紙條結果判讀示意

顏色說(shuō)明：本產(chǎn)品為變色雙矯正顯色試紙條，其中C線(xiàn)為紫色，T1為紅色，T2為藍色。在探針A和探針B等摩爾濃度混合，且終濃度≤500nM時(shí)，帶有FAM標記的探針酶切后，T1顯色為紅色，C線(xiàn)逐漸變?yōu)樗{色；帶有Dig標記的探針酶切后，T2顯色為藍色，C線(xiàn)逐漸變?yōu)榧t色，從而達到互相矯正的目的。

1.? ?陽(yáng)性（+）：

試紙條質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）和2條檢測線(xiàn)（T線(xiàn)）均出現條帶，其中T1為紅色，T2為藍色，C線(xiàn)為紫色；試紙條質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）不顯色，T1為紅色，T2為藍色時(shí)，說(shuō)明Cas12和Cas13可進(jìn)行有效酶切，并激活報告基團顯色，相應的靶基因均可判定為陽(yáng)性。

試紙條質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）和其中1條檢測線(xiàn)（T線(xiàn)）出現條帶，其中：T1為紅色，C線(xiàn)為藍色時(shí)，說(shuō)明FAM標記信號分子的相應靶基因可判定為陽(yáng)性；T2為藍色，C線(xiàn)為紅色時(shí)，說(shuō)明Dig標記分子的相應的靶基因可判定為陽(yáng)性。

2.??陰性（-）：

試紙條質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）為紫色色條帶，檢測線(xiàn)（T線(xiàn)）不顯色，判定為陰性結果。該結果表明Cas12或Cas13均不能切割報告分子，未能激活報告基團顯色。

3.??無(wú)效：

試紙條質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）和2條檢測線(xiàn)（T線(xiàn)）均未出現條帶，提示所用的試紙條或擴增試劑可能已經(jīng)損壞、失效或操作有誤。此時(shí)，應仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，重新擴增和檢測。如果問(wèn)題仍然存在，應立即停止使用同一批號的產(chǎn)品，并與當地供應商聯(lián)系。

注意事項及安全提示:

1.?本產(chǎn)品應結合探針使用，如探針合成純度不足，探針含游離的Biotin或者游離的FITC時(shí)，會(huì )導致以超純水為陰性對照的切割產(chǎn)物T線(xiàn)呈現紅色，即陰性對照呈現假陽(yáng)性結果。

2.?本產(chǎn)品可用于探針合成質(zhì)量的檢測。調整空白陰性對照中探針的使用濃度至400 nM，并進(jìn)行切割反應。當試紙條結合墊端浸入Cas12/Cas13切割產(chǎn)物后的5~7 min內，試紙條T線(xiàn)顯紅色，即說(shuō)明探針純度難以滿(mǎn)足實(shí)驗要求，會(huì )因探針純度不足導致假陽(yáng)性結果。建議更換探針合成供應商，并重新合成探針。

3.?本產(chǎn)品僅供科研使用。使用前請仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作。違反或者未按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作可能導致錯誤結果。

4.?產(chǎn)品應依照說(shuō)明書(shū)要求，儲存于合適的環(huán)境和溫度下，并在有效期內使用。儲存不當或產(chǎn)品過(guò)期可能導致錯誤結果。打開(kāi)包裝后請盡快使用試紙條，以免因試紙條受潮影響試驗結果。檢測環(huán)境光線(xiàn)不足，操作者色弱等因素均可能導致錯誤結果。

5.?使用完畢后，應盡快將紙條裝進(jìn)密封袋，妥善處理。本產(chǎn)品為一次性使用產(chǎn)品，僅限科研，請勿重復使用。

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