產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

MTT 比色法是一種檢測細胞存活和生長(cháng)的方法。 MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT 檢測原理為活細胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍紫色 Formazan 并沉積在細胞中，而死細胞無(wú)此功能。在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解。然后通過(guò)酶標儀可以測定 570nm 波長(cháng)附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

warbio MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒采用了特有的 Formazan solvent，使檢測本底低，靈敏度高，線(xiàn)性范圍寬.。

試劑盒組分 

組分 A: MTT Solution(5mg/ml)  5 mL      -20℃，避光

組分 B: Formazan Solvent       60 mL     RT

保存條件：

    -20℃，避光 條件下保存，保質(zhì)期 12 個(gè)月。

操作步驟(僅供參考)：

1、 細胞用含血清的培養液培養至對數生長(cháng)期，常規胰蛋白酶消化液消化細胞(懸浮細胞無(wú)需消化)。

2、 低速離心，收集細胞沉淀。

3、 用培養液重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸液，并計數。

4、 細胞接種于 96 孔培養板，一般接種密度為 3000～10000 個(gè)細胞/孔。通常細胞增殖實(shí)驗每孔加 3000 個(gè)細胞，細胞毒性實(shí)驗每孔加入 6000 個(gè)細胞。具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定。

5、 37℃ 5%CO2繼續培養或按照實(shí)驗具體需要進(jìn)行培養，一般培養 6～24h。

6、 按照實(shí)驗具體要求，給予 0～20μl 干預藥物處理，37℃ 5%CO2繼續培養至合適時(shí)間。

7、 棄培養液，每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鮮培養液，在細胞培養箱內繼續孵育 4h。

8、 棄培養液，每孔加入 110μl Formazan solvent，置搖床上低速振蕩 10 min，使結晶物充分溶解。如果紫色結晶較小或較少，溶解的時(shí)間會(huì )短一些。如果紫色結晶較大或較多，溶解的時(shí)間會(huì )長(cháng)一些。

9、 在酶聯(lián)免疫檢測儀 570nm 測定各孔吸光度。

      注意事項

MTT solution 盡量減少反復凍融的次數，當顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請勿使用。

由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測，如果細胞培養時(shí)間較長(cháng)，應注意蒸發(fā)問(wèn)題。

 MTT solution 在低溫情況下會(huì )凝固，置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解后使用。

Formazan solvent 可以-20℃儲存，當產(chǎn)生沉淀或凝固時(shí)可以 37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

觀(guān)察 formazan 是否完全溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀(guān)察。

培養細胞時(shí)盡量細菌避免污染。

應注意設立 OD 調零孔和對照。

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。。

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