產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

LysoSensor探針是一種區分酸性細胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針，能夠聚集在呈質(zhì)子化的酸性細胞器上。這一質(zhì)子化過(guò)程使得因弱堿性側鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放，促使熒光信號增強。因此，LysoSensor探針遇酸后熒光信號呈現pH依賴(lài)性的增強。

本品LysoSensor? Yellow/Blue DND-160 (PDMPO)是一種用于測定溶酶體pH值的比率測量型探針，也是LysoTracker?系列探針中唯一的一種pH依賴(lài)型顯示雙激發(fā)和雙發(fā)射波長(cháng)的熒光探針，該探針在中性環(huán)境中產(chǎn)生藍色熒光，但當所處環(huán)境變?yōu)槠嵝詴r(shí)，則發(fā)射黃色熒光。本品以溶于無(wú)水DMSO的1mM儲存液形式提供。

產(chǎn)品性質(zhì)

分子式（Molecular Formula）：C20H22N4O3

分子量（Molecular Weight）：366.4188

Ex/Em：Ex=329nm,384nm   Em=440nm,540nm

pKa：～4.2

步驟說(shuō)明

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據不同的實(shí)驗要求、細胞類(lèi)型、細胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用培養基或合適的緩沖液將1mM 儲存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度至少為1μM；

注1：為了降低探針加載過(guò)度可能引起的假陽(yáng)性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。2）若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育，會(huì )觀(guān)察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現象。

注2：工作液現配現用。

2. 染色

2.1 對于貼壁細胞

1）將細胞置于培養皿中的蓋玻片上，加入合適培養基，使其爬片生長(cháng)。

2）待細胞生長(cháng)到合適豐度，吸除培養液，加入適量37℃預熱的含探針工作液。于生長(cháng)狀態(tài)下孵育30min～2h（具體孵育時(shí)間需根據細胞類(lèi)型而定）。

      注意：對LysoSensor? YellowBlue DND-160 (PDMPO)內化過(guò)程的動(dòng)力學(xué)研究表明，活細胞攝取此染料僅需數秒即可。缺點(diǎn)在于此探針可能引起溶酶體產(chǎn)生“堿性效應Alkalizing effect”，也就是說(shuō)過(guò)長(cháng)孵育時(shí)間會(huì )誘導溶酶體pH值提高。建議僅當該探針于37℃孵育細胞1-5min才可用作pH指示劑。

3）利用新鮮培養基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀(guān)察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(cháng)染色時(shí)間。

2.2 對于懸浮細胞

1）離心，吸除上清。

2）利用37℃預熱的探針工作液重懸細胞，于生長(cháng)狀態(tài)下孵育30min～2h（具體時(shí)間需根據細胞類(lèi)型而定）。

注：對LysoSensor? YellowBlue DND-160 (PDMPO)內化過(guò)程的動(dòng)力學(xué)研究表明，活細胞攝取此染料僅需數秒即可。缺點(diǎn)在于此探針可能引起溶酶體產(chǎn)生“堿性效應Alkalizing effect”，也就是說(shuō)過(guò)長(cháng)孵育時(shí)間會(huì )誘導溶酶體pH值提高。建議僅當該探針于37℃孵育細胞1-5min才可用作pH指示劑。

3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養液重懸細胞。

4）置于熒光鏡下觀(guān)察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長(cháng)染色時(shí)間。

注：對于懸浮細胞，也可將細胞貼附于經(jīng)BD Cell-Tak處理過(guò)的蓋玻片上，然后使用類(lèi)似于貼壁細胞的方法進(jìn)行染色。

注意事項

1）不能儲存在無(wú)霜冰箱，建議按照單次用量分裝于-20℃凍存。

2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20℃避光干燥保存，避免反復凍融，有效期6個(gè)月。

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