產(chǎn)品描述

        HOLMES ssDNA reporter (FAM)是單鏈DNA寡核苷酸探針，5′端標記FAM熒光報告基團 (Reporter)，3′端標記熒光淬滅基團 (Quencher)。當HOLMES ssDNA reporter探針完整時(shí)，報告基團發(fā)射的熒光信號會(huì )被淬滅基團淬滅。而當HOLMES ssDNA reporter探針被切斷后，5'端的FAM熒光報告基團和淬滅基團分離，從而發(fā)出可被檢測的熒光信號。常見(jiàn)的Cas12a、Cas12b和Cas12f在與guide RNA、target DNA組成三元復合物后，都會(huì )被激活針對ssDNA的反式剪切活性，因此HOLMES ssDNA reporter (FAM)可以作為Cas12家族反式剪切的底物，通過(guò)發(fā)出放大的熒光信號指示特異靶標的存在。
HOLMES ssDNA reporter (FAM)探針經(jīng)過(guò)特別的序列優(yōu)化，對Cas12a、Cas12b和Cas12f反式切割活性高度敏感，可作為Cas12家族反式剪切的報告探針，被廣泛用于CRISPR診斷反應體系以便對靶標核酸進(jìn)行快速檢測。

 實(shí)驗流程

1.反式剪切實(shí)驗體系

◆ 反式剪切體系中各組分的用量可以根據不同的實(shí)驗目的進(jìn)行調整，用量較少時(shí)可先將各組分稀釋后加入體系；
◆ 建議使用低吸附的離心管、吸頭等耗材；
◆ 反式剪切體系中探針的用量和預期反應到達平臺期的時(shí)間可參考各批號Cas酶transU的具體數值，詳見(jiàn)本公司提供的COA檢測報告。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測熒光信號，每30 sec采集一次熒光信號，反應溫度根據不同的Cas12酶最適溫度進(jìn)行設定。

 產(chǎn)品組分

a.HOLMES ssDNA reporter (FAM)總量為1 OD (約為11.53 nmol)，為干粉狀態(tài)。使用前請先短暫離心，然后加入115.3 μL DNase/RNase-Free Water溶解，得到濃度為100 μM的貯存液，在無(wú)反復凍融的條件下可于-80℃避光保存6～12個(gè)月。使用前再將貯存液用DNase/RNase-Free Water稀釋成10 μM的工作液，按下表推薦的濃度加入CRISPR剪切反應體系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6個(gè)月內使用。

 保存條件

        -20℃避光儲存；≦4℃運輸。