產(chǎn)品簡(jiǎn)介

        HOLMES ssRNA reporter (FAM)是單鏈RNA寡核苷酸探針，5′端標記FAM熒光報告基團（Reporter），3′端標記熒光淬滅基團(Quencher)。當HOLMES ssRNA reporter探針完整時(shí)，報告基團發(fā)射的熒光信號會(huì )被淬滅基團淬滅。而當HOLMES ssRNA reporter探針被切斷后，5'端的FAM熒光報告基團和淬滅基團分離，從而發(fā)出可被檢測的熒光信號。常見(jiàn)的Cas13酶在與guide RNA、target RNA組成三元復合物后，都會(huì )被激發(fā)出針對ssRNA的反式剪切活性(或稱(chēng)為旁路切割活性)，將HOLMES ssRNA reporter探針切碎，并發(fā)出熒光信號。
HOLMES ssRNA reporter (FAM)探針經(jīng)過(guò)特別的序列優(yōu)化，對Cas13反式切割活性高度敏感，可作為Cas13家族蛋白反式切割反應的報告探針，廣泛用于CRISPR診斷反應體系以便對靶標核酸進(jìn)行快速檢測。

 實(shí)驗流程

1.反式剪切實(shí)驗體系

◆ 反式剪切體系中各組分的用量可以根據不同的實(shí)驗目的進(jìn)行調整，用量較少時(shí)可先將各組分稀釋后加入體系；
◆ 建議使用低吸附的離心管、吸頭等耗材；
◆ 反式剪切體系中探針的用量和預期反應到達平臺期的時(shí)間可參考各批號Cas酶transU的具體數值，詳見(jiàn)本公司提供的COA檢測報告。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測熒光信號，每30 sec采集一次熒光信號，反應溫度根據不同的Cas13酶最適溫度進(jìn)行設定。

 產(chǎn)品組分

a.HOLMES ssRNA reporter (FAM)總量為1 OD (約為8.45 nmol)，為干粉狀態(tài)。使用前請先短暫離心，然后加入84.5 μL DNase/RNase-Free Water溶解，得到濃度為100 μM的貯存液，在無(wú)反復凍融的條件下可于-80℃避光保存6～12個(gè)月。使用前再將貯存液用DNase/RNase-Free Water稀釋成10 μM的工作液，按下表推薦的濃度加入CRISPR剪切反應體系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6個(gè)月內使用。

 保存條件

        -80℃避光儲存；≦4℃運輸。