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10×HOLMES Buffer 1
| 貨號 | 32005 | 售價(jià)（元） | 300 |
| 規格 | 5×1 mL | CAS號 |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
10×HOLMES Buffer 1是適用于Cas12蛋白反式切割反應的專(zhuān)用緩沖液。該反應緩沖液的成分經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可有效提升Cas12蛋白的反式切割活性，而不影響其檢測靶標的特異性，因此，可被用于Cas12介導的CRISPR診斷反應體系。常見(jiàn)的Cas12家族蛋白，如Cas12a（Cpf1）、Cas12b（C2c1）和Cas12f（Cas14）等，均可使用HOLMES Buffer 1作為反應緩沖液。
實(shí)驗流程
以L(fǎng)bCas12a反式剪切實(shí)驗為例(20 μL反應體系，需加入10×HOLMES Buffer 1的體積為2 μL)：
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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10 × HOLMES Buffer 1 |
2 μL |
1 × |
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10 μM LbCas12a Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM crRNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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1 μM Target DNA |
0.5~5 μL |
25~250 nM |
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10 μM ssDNA Reporter |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free Water |
Up to 20 μL |
◆ 反式剪切體系中各組分的用量可以根據不同的實(shí)驗目的進(jìn)行調整，用量較少時(shí)可先將各組分稀釋后加入體系，LbCas12a Nuclease可用1×HOLMES Buffer 1稀釋?zhuān)♂尯笮枇⒓词褂茫ㄈ粢♂尯蟮腃as12酶長(cháng)期保存，請使用Cas12 Dilution Buffer，#32012），crRNA、Target DNA及ssDNA Reporter可用Nuclease-free Water稀釋?zhuān)珮O低濃度的Target DNA（例如LOD實(shí)驗）建議用0.1% Tween 20稀釋并使用低吸附的離心管、吸頭等耗材。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測熒光信號，37℃反應，每30 sec采集一次熒光信號。
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組分 |
32005 |
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● 10×HOLMES Buffer 1 |
5×1 mL |
a.SpCas9 H840A Nickase濃度為10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol規格的總體積為10 μL，1,000 pmol規格的總體積為100 μL；
保存條件
4℃儲存；常溫運輸。
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