正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數微生物中，是植物體內苯丙烷類(lèi)代謝的關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類(lèi)植保素、黃酮類(lèi)色素等合成密切相關(guān)，在植物正常生長(cháng)發(fā)育和抵御病菌侵害過(guò)程中起重要作用。

測定原理：

PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm處有最大吸收值，通過(guò)測定吸光值升高速率計算PAL活性。

組成：

試劑二：粉劑×3瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入4ml蒸餾水水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；

自備儀器和用品：

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

混勻，30℃ 準確水浴30min

混勻，靜置10min后，290nm處記錄測定管吸光值A1和對照管吸光值A2，△A=A1-A2。

注意：對照管只要做一管

PAL活性計算：

（1） 按蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白在每ml反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個(gè)酶活性單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（Cpr× V樣）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每ml反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個(gè)酶活性單位。

PAL（U/g鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V反總：反應體系總體積，1.04ml； V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；